中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
42期
8536-8540
,共5页
目的:存在于细胞表面的糖复合物参与细胞的通讯、增殖、迁移、分化等生理过程,在机体中具有复杂的生物学调控作用.探讨氮杂糖化合物SZL在体外对人宫颈癌HeLa细胞生长、DNA损伤、线粒体膜电位以及细胞凋亡的干预.方法:实验于2004-12/2006-12在北京大学医学部细胞生物学系完成.①实验材料:人子宫颈癌HeLa细胞株由北京大学医学部细胞生物学系杜晓娟副教授提供.SZL由北京大学天然药物及仿生药物重点实验室叶新山教授合成.②实验方法:取对数生长期HeLa细胞,消化后制成细胞悬液,按1.5×103/孔的密度接种,培养24 h细胞完全贴壁后,SZL组加入5.10,25,50,100 μmol/L的SZL,空白对照组加入DMEM培养液.③实验评估:SZL作用24,48,72 h后,采用酸性磷酸酶法检测细胞生长抑制情况,瑞氏染色镜下观察细胞形态;AnnexinV-PI染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Rhodamine123标记活细胞后,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化;Western Blot法检测SZL作用后凋亡相关蛋白的表达;单细胞凝胶电泳检测SZL作用后细胞DNA损伤情况.结果:①细胞生长抑制:5,10,25,50,100 μmol/L SZL作用24,48,72 h后的半数抑制浓度分别为73.6,43.2,33.6 μmol/L,显著抑制Hela细胞的增殖.镜下空白对照组HeLa细胞分布均匀,胞质透明清亮,呈铺展状态生长;50 μmol/L SZL作用24 h后,HeLa细胞密度变稀,体积变小,胞核染色质呈聚集状态.②细胞凋亡:50,100 μmol/L SZL作用24 h后细胞凋亡率分别为(3.51±0.41)%,(58.46±8.45)%;在24～48 h过程中,凋亡的细胞逐渐坏死,SZL作用48 h后细胞凋亡率分别为(10.51±2.20)%,(17.29±7.52)%.空白对照组24,48 h后细胞凋亡率均为1%.③线粒体跨膜电位的变化:50 μmol/L SZL作用24,48 h后,HeLa细胞的线粒体膜电位平均荧光强度均明显低于空白对照组(P＜0.01).④凋亡相关蛋白的表达:25,50,100 μmol/L SZL作用HeLa细胞48 h后,凋亡相关蛋白pro-caspase3、Bcl-2表达降低,细胞色素c含量升高.⑤细胞DNA损伤;50 μmol/L SZL作用24 h后,受损细胞DNA在电场中迁出,呈现彗星状拖尾.结论:氮杂糖类化合物SZL能够抑制HeLa细胞的增殖,诱导细胞发生DNA损伤,通过干预线粒体途径实现细胞凋亡.
目的:存在于細胞錶麵的糖複閤物參與細胞的通訊、增殖、遷移、分化等生理過程,在機體中具有複雜的生物學調控作用.探討氮雜糖化閤物SZL在體外對人宮頸癌HeLa細胞生長、DNA損傷、線粒體膜電位以及細胞凋亡的榦預.方法:實驗于2004-12/2006-12在北京大學醫學部細胞生物學繫完成.①實驗材料:人子宮頸癌HeLa細胞株由北京大學醫學部細胞生物學繫杜曉娟副教授提供.SZL由北京大學天然藥物及倣生藥物重點實驗室葉新山教授閤成.②實驗方法:取對數生長期HeLa細胞,消化後製成細胞懸液,按1.5×103/孔的密度接種,培養24 h細胞完全貼壁後,SZL組加入5.10,25,50,100 μmol/L的SZL,空白對照組加入DMEM培養液.③實驗評估:SZL作用24,48,72 h後,採用痠性燐痠酶法檢測細胞生長抑製情況,瑞氏染色鏡下觀察細胞形態;AnnexinV-PI染色後,流式細胞儀檢測細胞凋亡率;Rhodamine123標記活細胞後,流式細胞儀檢測線粒體膜電位的變化;Western Blot法檢測SZL作用後凋亡相關蛋白的錶達;單細胞凝膠電泳檢測SZL作用後細胞DNA損傷情況.結果:①細胞生長抑製:5,10,25,50,100 μmol/L SZL作用24,48,72 h後的半數抑製濃度分彆為73.6,43.2,33.6 μmol/L,顯著抑製Hela細胞的增殖.鏡下空白對照組HeLa細胞分佈均勻,胞質透明清亮,呈鋪展狀態生長;50 μmol/L SZL作用24 h後,HeLa細胞密度變稀,體積變小,胞覈染色質呈聚集狀態.②細胞凋亡:50,100 μmol/L SZL作用24 h後細胞凋亡率分彆為(3.51±0.41)%,(58.46±8.45)%;在24～48 h過程中,凋亡的細胞逐漸壞死,SZL作用48 h後細胞凋亡率分彆為(10.51±2.20)%,(17.29±7.52)%.空白對照組24,48 h後細胞凋亡率均為1%.③線粒體跨膜電位的變化:50 μmol/L SZL作用24,48 h後,HeLa細胞的線粒體膜電位平均熒光彊度均明顯低于空白對照組(P＜0.01).④凋亡相關蛋白的錶達:25,50,100 μmol/L SZL作用HeLa細胞48 h後,凋亡相關蛋白pro-caspase3、Bcl-2錶達降低,細胞色素c含量升高.⑤細胞DNA損傷;50 μmol/L SZL作用24 h後,受損細胞DNA在電場中遷齣,呈現彗星狀拖尾.結論:氮雜糖類化閤物SZL能夠抑製HeLa細胞的增殖,誘導細胞髮生DNA損傷,通過榦預線粒體途徑實現細胞凋亡.
목적:존재우세포표면적당복합물삼여세포적통신、증식、천이、분화등생리과정,재궤체중구유복잡적생물학조공작용.탐토담잡당화합물SZL재체외대인궁경암HeLa세포생장、DNA손상、선립체막전위이급세포조망적간예.방법:실험우2004-12/2006-12재북경대학의학부세포생물학계완성.①실험재료:인자궁경암HeLa세포주유북경대학의학부세포생물학계두효연부교수제공.SZL유북경대학천연약물급방생약물중점실험실협신산교수합성.②실험방법:취대수생장기HeLa세포,소화후제성세포현액,안1.5×103/공적밀도접충,배양24 h세포완전첩벽후,SZL조가입5.10,25,50,100 μmol/L적SZL,공백대조조가입DMEM배양액.③실험평고:SZL작용24,48,72 h후,채용산성린산매법검측세포생장억제정황,서씨염색경하관찰세포형태;AnnexinV-PI염색후,류식세포의검측세포조망솔;Rhodamine123표기활세포후,류식세포의검측선립체막전위적변화;Western Blot법검측SZL작용후조망상관단백적표체;단세포응효전영검측SZL작용후세포DNA손상정황.결과:①세포생장억제:5,10,25,50,100 μmol/L SZL작용24,48,72 h후적반수억제농도분별위73.6,43.2,33.6 μmol/L,현저억제Hela세포적증식.경하공백대조조HeLa세포분포균균,포질투명청량,정포전상태생장;50 μmol/L SZL작용24 h후,HeLa세포밀도변희,체적변소,포핵염색질정취집상태.②세포조망:50,100 μmol/L SZL작용24 h후세포조망솔분별위(3.51±0.41)%,(58.46±8.45)%;재24～48 h과정중,조망적세포축점배사,SZL작용48 h후세포조망솔분별위(10.51±2.20)%,(17.29±7.52)%.공백대조조24,48 h후세포조망솔균위1%.③선립체과막전위적변화:50 μmol/L SZL작용24,48 h후,HeLa세포적선립체막전위평균형광강도균명현저우공백대조조(P＜0.01).④조망상관단백적표체:25,50,100 μmol/L SZL작용HeLa세포48 h후,조망상관단백pro-caspase3、Bcl-2표체강저,세포색소c함량승고.⑤세포DNA손상;50 μmol/L SZL작용24 h후,수손세포DNA재전장중천출,정현혜성상타미.결론:담잡당류화합물SZL능구억제HeLa세포적증식,유도세포발생DNA손상,통과간예선립체도경실현세포조망.
