畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2007年
10期
22-25
,共4页
李云岗%孙稳平%李新生%高凤山%郝慧芳%夏春
李雲崗%孫穩平%李新生%高鳳山%郝慧芳%夏春
리운강%손은평%리신생%고봉산%학혜방%하춘
IgA%CH1-CH3%猪%表达
IgA%CH1-CH3%豬%錶達
IgA%CH1-CH3%저%표체
在猪IgA重链CH1-CH3区设计一对引物,用RT-PCR方法从地方杂交品种长白猪肠系膜淋巴结组织中扩增出预期大小的片断,插入pGEM-T easy载体,测序并与约克夏猪、人及其他动物的IgA进行序列比较.随后,将该序列酶切后引入到pQE-30表达载体相应位点,转化JM109大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE分析.结果显示,本研究克隆了猪IgA重链恒定区部分CH1亚区及完整的CH2-CH3亚区基因序列,全长822 bp,编码274个氨基酸,该序列与GenBank上登录的约克夏猪参考序列核苷酸序列同源率为99.8%,有2处核苷酸变异,氨基酸序列的同源率为100%.但与人及其他动物显示从84%～51%不等的同源性;在大肠杆菌表达出约31 ku的蛋白条带,表达量约占菌体总蛋白的32.3%.本试验为今后的IgA免疫功能研究及基因工程化检测试剂开发打下了基础.
在豬IgA重鏈CH1-CH3區設計一對引物,用RT-PCR方法從地方雜交品種長白豬腸繫膜淋巴結組織中擴增齣預期大小的片斷,插入pGEM-T easy載體,測序併與約剋夏豬、人及其他動物的IgA進行序列比較.隨後,將該序列酶切後引入到pQE-30錶達載體相應位點,轉化JM109大腸桿菌,經IPTG誘導錶達後,進行SDS-PAGE分析.結果顯示,本研究剋隆瞭豬IgA重鏈恆定區部分CH1亞區及完整的CH2-CH3亞區基因序列,全長822 bp,編碼274箇氨基痠,該序列與GenBank上登錄的約剋夏豬參攷序列覈苷痠序列同源率為99.8%,有2處覈苷痠變異,氨基痠序列的同源率為100%.但與人及其他動物顯示從84%～51%不等的同源性;在大腸桿菌錶達齣約31 ku的蛋白條帶,錶達量約佔菌體總蛋白的32.3%.本試驗為今後的IgA免疫功能研究及基因工程化檢測試劑開髮打下瞭基礎.
재저IgA중련CH1-CH3구설계일대인물,용RT-PCR방법종지방잡교품충장백저장계막림파결조직중확증출예기대소적편단,삽입pGEM-T easy재체,측서병여약극하저、인급기타동물적IgA진행서렬비교.수후,장해서렬매절후인입도pQE-30표체재체상응위점,전화JM109대장간균,경IPTG유도표체후,진행SDS-PAGE분석.결과현시,본연구극륭료저IgA중련항정구부분CH1아구급완정적CH2-CH3아구기인서렬,전장822 bp,편마274개안기산,해서렬여GenBank상등록적약극하저삼고서렬핵감산서렬동원솔위99.8%,유2처핵감산변이,안기산서렬적동원솔위100%.단여인급기타동물현시종84%～51%불등적동원성;재대장간균표체출약31 ku적단백조대,표체량약점균체총단백적32.3%.본시험위금후적IgA면역공능연구급기인공정화검측시제개발타하료기출.
