中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
10期
53-58
,共6页
金科铭%曹学君%庄英萍%储炬%张嗣良
金科銘%曹學君%莊英萍%儲炬%張嗣良
금과명%조학군%장영평%저거%장사량
可回用两水相%光敏感聚合物%pH敏感聚合物%6-APA%固定化酶青霉素酰化酶
可迴用兩水相%光敏感聚閤物%pH敏感聚閤物%6-APA%固定化酶青黴素酰化酶
가회용량수상%광민감취합물%pH민감취합물%6-APA%고정화매청매소선화매
在光敏感可回用高聚物PNBC与pH敏感型可回用高聚物PADB形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应.在这个两水相体系中,通过优化,在1%NaCl存在下,6-APA的分配系数可达5.78.催化动力学显示,达平衡的时间近7h,反应最高得率约85.3%(pH 7.8,20℃).较相近条件下的单水相反应得率提高近20%.在反应过程中,通过底物及产物的分配系数检测,发现底物分配系数变化不大,而产物6-APA及苯乙酸的分配系数发生很大变化,从而引起产物的得率变化.在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果.此外,采用固定化酶较固定化细胞效率高,占用下相体积小,较游离酶稳定性高,且完全单侧分配在下相.因此,在两水相中进行固定化酶的催化反应具有明显的优越性.形成两水相的高聚物PNBC通过488nm的激光照射或经滤光的450nm光源照射得到回收;pH敏感型成相聚合物PADB可通等电点4.1沉淀可实现循环利用,高聚物的回收率在95%~98%之间,按此回收率计算,聚合物可使用60次以上.
在光敏感可迴用高聚物PNBC與pH敏感型可迴用高聚物PADB形成的兩水相體繫中進行固定化青黴素酰化酶的相轉移催化青黴素G產生6-APA的反應.在這箇兩水相體繫中,通過優化,在1%NaCl存在下,6-APA的分配繫數可達5.78.催化動力學顯示,達平衡的時間近7h,反應最高得率約85.3%(pH 7.8,20℃).較相近條件下的單水相反應得率提高近20%.在反應過程中,通過底物及產物的分配繫數檢測,髮現底物分配繫數變化不大,而產物6-APA及苯乙痠的分配繫數髮生很大變化,從而引起產物的得率變化.在兩水相中,底物及產物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青黴素G進入下相經酶催化產生的6-APA及苯乙痠又轉入上相,從而解除瞭青黴素酰化酶催化反應的底物及產物抑製作用,達到提高產物得率的效果.此外,採用固定化酶較固定化細胞效率高,佔用下相體積小,較遊離酶穩定性高,且完全單側分配在下相.因此,在兩水相中進行固定化酶的催化反應具有明顯的優越性.形成兩水相的高聚物PNBC通過488nm的激光照射或經濾光的450nm光源照射得到迴收;pH敏感型成相聚閤物PADB可通等電點4.1沉澱可實現循環利用,高聚物的迴收率在95%~98%之間,按此迴收率計算,聚閤物可使用60次以上.
재광민감가회용고취물PNBC여pH민감형가회용고취물PADB형성적량수상체계중진행고정화청매소선화매적상전이최화청매소G산생6-APA적반응.재저개량수상체계중,통과우화,재1%NaCl존재하,6-APA적분배계수가체5.78.최화동역학현시,체평형적시간근7h,반응최고득솔약85.3%(pH 7.8,20℃).교상근조건하적단수상반응득솔제고근20%.재반응과정중,통과저물급산물적분배계수검측,발현저물분배계수변화불대,이산물6-APA급분을산적분배계수발생흔대변화,종이인기산물적득솔변화.재량수상중,저물급산물주요분배재상상,고정화매분배재하상,저물청매소G진입하상경매최화산생적6-APA급분을산우전입상상,종이해제료청매소선화매최화반응적저물급산물억제작용,체도제고산물득솔적효과.차외,채용고정화매교고정화세포효솔고,점용하상체적소,교유리매은정성고,차완전단측분배재하상.인차,재량수상중진행고정화매적최화반응구유명현적우월성.형성량수상적고취물PNBC통과488nm적격광조사혹경려광적450nm광원조사득도회수;pH민감형성상취합물PADB가통등전점4.1침정가실현순배이용,고취물적회수솔재95%~98%지간,안차회수솔계산,취합물가사용60차이상.