CAJ | 학술논문

目的:分析α防御素3前体蛋白对于克雷伯菌和大肠杆菌的杀菌效果,为进一步研究人类α防御素3的杀菌机制提供依据.方法:实验于2005-11/2006-09在上海交通大学生命科学技术学院刘建华实验室完成.将α防御素3前体的编码基因克隆到载体pDEST17中,载体转化入大肠杆菌DE3细胞,通过体外诱导及亲和纯化的方法获得α防御素3前体蛋白.根据在不同蛋白浓度下生存下来大肠杆菌和克雷伯菌所占的比例以及导致50%,90%和99%细菌死亡(LD50,LD90和LD99)时人α防御素3前体蛋白浓度来判断前体蛋白的杀菌作用.结果:①在1 L培养基培养条件下,可获得纯化后α防御素3前体蛋白12 mg,复性效率为15%～20%.②蛋白浓度为5,10,15和30 mg/L时,克雷伯菌仔活率分别为50%,33%,10%和4%.蛋白浓度为10,20,30和45 mg/L时,大肠杆菌存活率分别为50%,10%,5%和1%.③克雷伯菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为5和35 mg/L.大肠杆菌50%和99%致死率的蛋白质浓度为10 mg/L和45 mg/L.结论:重组纯化的人α防御素3前体蛋白具有有效杀灭大肠杆菌和克雷伯菌的作用.
목적:분석α방어소3전체단백대우극뢰백균화대장간균적살균효과,위진일보연구인류α방어소3적살균궤제제공의거.방법:실험우2005-11/2006-09재상해교통대학생명과학기술학원류건화실험실완성.장α방어소3전체적편마기인극륭도재체pDEST17중,재체전화입대장간균DE3세포,통과체외유도급친화순화적방법획득α방어소3전체단백.근거재불동단백농도하생존하래대장간균화극뢰백균소점적비례이급도치50%,90%화99%세균사망(LD50,LD90화LD99)시인α방어소3전체단백농도래판단전체단백적살균작용.결과:①재1 L배양기배양조건하,가획득순화후α방어소3전체단백12 mg,복성효솔위15%～20%.②단백농도위5,10,15화30 mg/L시,극뢰백균자활솔분별위50%,33%,10%화4%.단백농도위10,20,30화45 mg/L시,대장간균존활솔분별위50%,10%,5%화1%.③극뢰백균50%화99%치사솔적단백질농도위5화35 mg/L.대장간균50%화99%치사솔적단백질농도위10 mg/L화45 mg/L.결론:중조순화적인α방어소3전체단백구유유효살멸대장간균화극뢰백균적작용.