中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2007年
4期
265-270
,共6页
宋慧%张学荣%周元聪%江涛%舒雨雁
宋慧%張學榮%週元聰%江濤%舒雨雁
송혜%장학영%주원총%강도%서우안
眼镜蛇%蛇毒%神经生长因子%蛋白表达
眼鏡蛇%蛇毒%神經生長因子%蛋白錶達
안경사%사독%신경생장인자%단백표체
目的 采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性.方法 将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白.超声破菌后,将上清液经Ni2+-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性.结果 经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性.加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF.结论 在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白.
目的 採用基因工程技術,在大腸桿菌(E.coli)中錶達廣西眼鏡蛇(黑眼鏡蛇)蛇毒神經生長因子(NGF)成熟蛋白併檢測其生物活性.方法 將天然廣西眼鏡蛇蛇毒的NGF蛋白基因剋隆至融閤錶達載體pET-40b(+)中,以C耑融閤瞭6箇組氨痠的形式在E.coli BL21(DE3)通過異丙基硫代半乳糖苷誘導錶達NGF蛋白.超聲破菌後,將上清液經Ni2+-NTA柱純化,收集併凍榦NGF融閤蛋白,用蛋白印跡法分析其NGF抗原活性,併通過促PC12細胞生長法觀察其生物活性.結果 經蛋白印跡分析可知在38 ku處的條帶具有NGF抗原活性.加入天然蛇毒NGF,生長軸突的PC12細胞為(83±3)%,重組品為(21±3)%,錶明經純化的融閤蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF.結論 在大腸桿菌中可以錶達齣有活性的蛇毒NGF蛋白.
목적 채용기인공정기술,재대장간균(E.coli)중표체엄서안경사(흑안경사)사독신경생장인자(NGF)성숙단백병검측기생물활성.방법 장천연엄서안경사사독적NGF단백기인극륭지융합표체재체pET-40b(+)중,이C단융합료6개조안산적형식재E.coli BL21(DE3)통과이병기류대반유당감유도표체NGF단백.초성파균후,장상청액경Ni2+-NTA주순화,수집병동간NGF융합단백,용단백인적법분석기NGF항원활성,병통과촉PC12세포생장법관찰기생물활성.결과 경단백인적분석가지재38 ku처적조대구유NGF항원활성.가입천연사독NGF,생장축돌적PC12세포위(83±3)%,중조품위(21±3)%,표명경순화적융합단백구유NGF생물활력,단활성약우천연사독NGF.결론 재대장간균중가이표체출유활성적사독NGF단백.
