临床耳鼻咽喉科杂志
臨床耳鼻嚥喉科雜誌
림상이비인후과잡지
LINCHUANG ER-BL-YANHOUKE ZAZHL
2005年
13期
611-613
,共3页
宋巍%胡吟燕%郭维%郑贵亮%翟所强%高维强
宋巍%鬍吟燕%郭維%鄭貴亮%翟所彊%高維彊
송외%호음연%곽유%정귀량%적소강%고유강
大鼠%耳蜗%大上皮嵴%嗜热菌蛋白酶
大鼠%耳蝸%大上皮嵴%嗜熱菌蛋白酶
대서%이와%대상피척%기열균단백매
目的:探讨利用酶消化和机械解剖相结合分离大鼠耳蜗大上皮嵴(GER)的方法.方法:取出生后0～3 d的SD大鼠耳蜗基底膜后,将其放入含有嗜热菌蛋白酶和少许DNA酶的D-Hank溶液中,37℃孵箱孵育25 min进行酶消化,然后在高倍显微镜下进行显微机械分离;对分离的GER细胞用免疫组织化学和RT-PCR扩增GER细胞特异性表达基因Hes1的方法进行鉴定,并进行GER的原代培养以验证其活性.结果:免疫组织化学染色表明分离的GER细胞是单一的上皮组织;对Hes1基因进行RT-PCR分析表明,分离的GER细胞表达该基因;分离的GER具有活性并可以进行原代培养.结论:利用酶消化和机械解剖相结合的方法可以分离出纯粹的有活性的GER,为进一步建立GER细胞系,进行各种基因转染试验以及耳蜗内的各种基础实验建立细胞模型提供有效的实验手段.
目的:探討利用酶消化和機械解剖相結閤分離大鼠耳蝸大上皮嵴(GER)的方法.方法:取齣生後0～3 d的SD大鼠耳蝸基底膜後,將其放入含有嗜熱菌蛋白酶和少許DNA酶的D-Hank溶液中,37℃孵箱孵育25 min進行酶消化,然後在高倍顯微鏡下進行顯微機械分離;對分離的GER細胞用免疫組織化學和RT-PCR擴增GER細胞特異性錶達基因Hes1的方法進行鑒定,併進行GER的原代培養以驗證其活性.結果:免疫組織化學染色錶明分離的GER細胞是單一的上皮組織;對Hes1基因進行RT-PCR分析錶明,分離的GER細胞錶達該基因;分離的GER具有活性併可以進行原代培養.結論:利用酶消化和機械解剖相結閤的方法可以分離齣純粹的有活性的GER,為進一步建立GER細胞繫,進行各種基因轉染試驗以及耳蝸內的各種基礎實驗建立細胞模型提供有效的實驗手段.
목적:탐토이용매소화화궤계해부상결합분리대서이와대상피척(GER)적방법.방법:취출생후0～3 d적SD대서이와기저막후,장기방입함유기열균단백매화소허DNA매적D-Hank용액중,37℃부상부육25 min진행매소화,연후재고배현미경하진행현미궤계분리;대분리적GER세포용면역조직화학화RT-PCR확증GER세포특이성표체기인Hes1적방법진행감정,병진행GER적원대배양이험증기활성.결과:면역조직화학염색표명분리적GER세포시단일적상피조직;대Hes1기인진행RT-PCR분석표명,분리적GER세포표체해기인;분리적GER구유활성병가이진행원대배양.결론:이용매소화화궤계해부상결합적방법가이분리출순수적유활성적GER,위진일보건립GER세포계,진행각충기인전염시험이급이와내적각충기출실험건립세포모형제공유효적실험수단.
