中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2003年
10期
7-14
,共8页
花群义%杨云庆%董俊%杨晶焰%贾建军%周晓黎%徐自忠
花群義%楊雲慶%董俊%楊晶燄%賈建軍%週曉黎%徐自忠
화군의%양운경%동준%양정염%가건군%주효려%서자충
赤羽病病毒%核蛋白基因%表达%ELISA
赤羽病病毒%覈蛋白基因%錶達%ELISA
적우병병독%핵단백기인%표체%ELISA
为获得赤羽病病毒(Akabane virus, AKAV)的核蛋白重组抗原,根据其基因序列(S mRNA)设计合成了1对特异性引物,对AKAV N基因进行RT-PCR扩增,产物大小约为696 bp,回收纯化后,将其克隆至pMD18-T质粒载体中,经核苷酸序列分析,与已报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白N的S mRNA基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与TIN毒株的同源性高达98.3%,推测的氨基酸同源性为97.6%,证实为AKAV的N基因.将该基因片段亚克隆插入pBAD/Thio TOPO表达载体,转化TOP10细胞,成功地构建了AKAV N基因重组表达载体.经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达AKAV核蛋白抗原.表达蛋白为融合蛋白,分子质量约42.5 ku,其表达产量约占菌体总蛋白的28%,融合蛋白中含有AKAV特异性核蛋白抗原,可作为ELISA包被抗原.
為穫得赤羽病病毒(Akabane virus, AKAV)的覈蛋白重組抗原,根據其基因序列(S mRNA)設計閤成瞭1對特異性引物,對AKAV N基因進行RT-PCR擴增,產物大小約為696 bp,迴收純化後,將其剋隆至pMD18-T質粒載體中,經覈苷痠序列分析,與已報道的多株AKAV編碼覈衣殼蛋白N的S mRNA基因比較後髮現,所測定毒株的覈苷痠序列與TIN毒株的同源性高達98.3%,推測的氨基痠同源性為97.6%,證實為AKAV的N基因.將該基因片段亞剋隆插入pBAD/Thio TOPO錶達載體,轉化TOP10細胞,成功地構建瞭AKAV N基因重組錶達載體.經L-araboinose誘導錶達,可穩定、高效地錶達AKAV覈蛋白抗原.錶達蛋白為融閤蛋白,分子質量約42.5 ku,其錶達產量約佔菌體總蛋白的28%,融閤蛋白中含有AKAV特異性覈蛋白抗原,可作為ELISA包被抗原.
위획득적우병병독(Akabane virus, AKAV)적핵단백중조항원,근거기기인서렬(S mRNA)설계합성료1대특이성인물,대AKAV N기인진행RT-PCR확증,산물대소약위696 bp,회수순화후,장기극륭지pMD18-T질립재체중,경핵감산서렬분석,여이보도적다주AKAV편마핵의각단백N적S mRNA기인비교후발현,소측정독주적핵감산서렬여TIN독주적동원성고체98.3%,추측적안기산동원성위97.6%,증실위AKAV적N기인.장해기인편단아극륭삽입pBAD/Thio TOPO표체재체,전화TOP10세포,성공지구건료AKAV N기인중조표체재체.경L-araboinose유도표체,가은정、고효지표체AKAV핵단백항원.표체단백위융합단백,분자질량약42.5 ku,기표체산량약점균체총단백적28%,융합단백중함유AKAV특이성핵단백항원,가작위ELISA포피항원.
