河北医科大学学报
河北醫科大學學報
하북의과대학학보
JOURNAL OF HEBEI MEDICAL UNIVERSITY
2003年
3期
133-135
,共3页
于丹军%金玉怀%王永祥%金士香%方艳辉%房文亮
于丹軍%金玉懷%王永祥%金士香%方豔輝%房文亮
우단군%금옥부%왕영상%금사향%방염휘%방문량
白细胞介素-22%淋巴细胞%克隆,分子%质粒%DNA
白細胞介素-22%淋巴細胞%剋隆,分子%質粒%DNA
백세포개소-22%림파세포%극륭,분자%질립%DNA
目的克隆人白细胞介素-22(human interleukin-22,hIL-22)基因及构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-22.方法从人外周血分离淋巴细胞,加刀豆蛋白A培养;提取总RNA,进行逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增;获得目的基因片段后,与pGEM-T载体连接成pGEM-T/hIL-22,转化大肠杆菌E.coli-DH5a大量繁殖后,提取质粒DNA,酶切鉴定、测序.用BamH1和Xho1将目的片段从pGEM-T/IL-22切下,与pcDNA3连接成pcDNA3/hIL-22,转化大肠杆菌E.coli-DH5a大量繁殖后,提取质粒DNA,酶切鉴定.结果pGEM/hIL-22内插入片段序列与hIL-22基因序列完全一致;pcDNA3/hIL-22经酶切鉴定与预期结果一致.结论本实验成功完成了hIL-22基因克隆和pcDNA3/hIL-22真核表达载体的构建.
目的剋隆人白細胞介素-22(human interleukin-22,hIL-22)基因及構建其真覈錶達質粒pcDNA3/hIL-22.方法從人外週血分離淋巴細胞,加刀豆蛋白A培養;提取總RNA,進行逆轉錄-聚閤酶鏈反應(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)擴增;穫得目的基因片段後,與pGEM-T載體連接成pGEM-T/hIL-22,轉化大腸桿菌E.coli-DH5a大量繁殖後,提取質粒DNA,酶切鑒定、測序.用BamH1和Xho1將目的片段從pGEM-T/IL-22切下,與pcDNA3連接成pcDNA3/hIL-22,轉化大腸桿菌E.coli-DH5a大量繁殖後,提取質粒DNA,酶切鑒定.結果pGEM/hIL-22內插入片段序列與hIL-22基因序列完全一緻;pcDNA3/hIL-22經酶切鑒定與預期結果一緻.結論本實驗成功完成瞭hIL-22基因剋隆和pcDNA3/hIL-22真覈錶達載體的構建.
목적극륭인백세포개소-22(human interleukin-22,hIL-22)기인급구건기진핵표체질립pcDNA3/hIL-22.방법종인외주혈분리림파세포,가도두단백A배양;제취총RNA,진행역전록-취합매련반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)확증;획득목적기인편단후,여pGEM-T재체련접성pGEM-T/hIL-22,전화대장간균E.coli-DH5a대량번식후,제취질립DNA,매절감정、측서.용BamH1화Xho1장목적편단종pGEM-T/IL-22절하,여pcDNA3련접성pcDNA3/hIL-22,전화대장간균E.coli-DH5a대량번식후,제취질립DNA,매절감정.결과pGEM/hIL-22내삽입편단서렬여hIL-22기인서렬완전일치;pcDNA3/hIL-22경매절감정여예기결과일치.결론본실험성공완성료hIL-22기인극륭화pcDNA3/hIL-22진핵표체재체적구건.
