中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2003年
3期
327-331
,共5页
韩月恒%张文红%沈岚%季少平%刘新平%药立波
韓月恆%張文紅%瀋嵐%季少平%劉新平%藥立波
한월항%장문홍%침람%계소평%류신평%약립파
OS-9基因,融合表达 ,金属螯合亲和层析,多克隆抗体
OS-9基因,融閤錶達 ,金屬螯閤親和層析,多剋隆抗體
OS-9기인,융합표체 ,금속오합친화층석,다극륭항체
OS-9基因广泛表达于人体多种组织,该基因的表达产物可能与肿瘤的发生相关.为获得可溶性表达的OS-9蛋白,制备多克隆抗体,深入了解OS-9基因的功能,将OS-9基因片段克隆入组氨酸标签融合的表达载体pET28a中,IPTG 诱导,利用金属螯合亲和层析(MCAC)进行纯化,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量.免疫家兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性.经表达形式分析证明,融合蛋白大部分可溶.薄层扫描分析纯度可达90%以上,Bradford法检测蛋白浓度约0.1 mg/ml.抗血清效价可达1∶3 200以上,Western印迹检测证明抗体特异性良好.经诱导表达及纯化制备出可溶的纯度较高的OS-9蛋白产物,并获得高效价特异性良好的多克隆抗体.
OS-9基因廣汎錶達于人體多種組織,該基因的錶達產物可能與腫瘤的髮生相關.為穫得可溶性錶達的OS-9蛋白,製備多剋隆抗體,深入瞭解OS-9基因的功能,將OS-9基因片段剋隆入組氨痠標籤融閤的錶達載體pET28a中,IPTG 誘導,利用金屬螯閤親和層析(MCAC)進行純化,薄層掃描及Bradford法檢測純化蛋白的純度與含量.免疫傢兔製備多剋隆抗體,利用間接ELISA法檢測抗體效價,Western印跡檢測抗體特異性.經錶達形式分析證明,融閤蛋白大部分可溶.薄層掃描分析純度可達90%以上,Bradford法檢測蛋白濃度約0.1 mg/ml.抗血清效價可達1∶3 200以上,Western印跡檢測證明抗體特異性良好.經誘導錶達及純化製備齣可溶的純度較高的OS-9蛋白產物,併穫得高效價特異性良好的多剋隆抗體.
OS-9기인엄범표체우인체다충조직,해기인적표체산물가능여종류적발생상관.위획득가용성표체적OS-9단백,제비다극륭항체,심입료해OS-9기인적공능,장OS-9기인편단극륭입조안산표첨융합적표체재체pET28a중,IPTG 유도,이용금속오합친화층석(MCAC)진행순화,박층소묘급Bradford법검측순화단백적순도여함량.면역가토제비다극륭항체,이용간접ELISA법검측항체효개,Western인적검측항체특이성.경표체형식분석증명,융합단백대부분가용.박층소묘분석순도가체90%이상,Bradford법검측단백농도약0.1 mg/ml.항혈청효개가체1∶3 200이상,Western인적검측증명항체특이성량호.경유도표체급순화제비출가용적순도교고적OS-9단백산물,병획득고효개특이성량호적다극륭항체.
