南华大学学报(医学版)
南華大學學報(醫學版)
남화대학학보(의학판)
JOURNAL OF NANHUA UNIVERSITY MEDICAL EDITION
2001年
2期
109-112,119
,共5页
珠蛋白基因%表达调控%报告基因%抑制子
珠蛋白基因%錶達調控%報告基因%抑製子
주단백기인%표체조공%보고기인%억제자
目的 探寻人类β-珠蛋白基因5′-帽位上游新转录调控元件；方法 利用重组DNA技术，构建及克隆3个含有人类β－基因不同5'帽位上游片段的荧光素酶报告基因重组载体（pGL2-promoter/SB-βRHB734、pGL2-promoter/SB-βRAB573、pGL2-promoter/SB-βRHfB263），分别将其导入Hela细胞中，采用β-半乳糖苷酶报告基因为转移效率内对照，空白的荧光素酶基因载体为基础对照，进行荧光素酶活性比较。结果 3个基因片段载体构建符合设计，其相对抑制活性分别为59.74%、80.97%、79.42%；结论 初步提示人类β-基因5’帽位上游-2132～-1822bp片段及-1822～-15559bp片段内可能存在有起负调控作用的顺式作用元件（抑制子），而-2277bp～-2132bp片段间未检出抑制子或增强子活性存在。此初步结果尚需进一步研究证实和阐明其结构与功能的关系。
目的 探尋人類β-珠蛋白基因5′-帽位上遊新轉錄調控元件；方法 利用重組DNA技術，構建及剋隆3箇含有人類β－基因不同5'帽位上遊片段的熒光素酶報告基因重組載體（pGL2-promoter/SB-βRHB734、pGL2-promoter/SB-βRAB573、pGL2-promoter/SB-βRHfB263），分彆將其導入Hela細胞中，採用β-半乳糖苷酶報告基因為轉移效率內對照，空白的熒光素酶基因載體為基礎對照，進行熒光素酶活性比較。結果 3箇基因片段載體構建符閤設計，其相對抑製活性分彆為59.74%、80.97%、79.42%；結論 初步提示人類β-基因5’帽位上遊-2132～-1822bp片段及-1822～-15559bp片段內可能存在有起負調控作用的順式作用元件（抑製子），而-2277bp～-2132bp片段間未檢齣抑製子或增彊子活性存在。此初步結果尚需進一步研究證實和闡明其結構與功能的關繫。
목적 탐심인류β-주단백기인5′-모위상유신전록조공원건；방법 이용중조DNA기술，구건급극륭3개함유인류β－기인불동5'모위상유편단적형광소매보고기인중조재체（pGL2-promoter/SB-βRHB734、pGL2-promoter/SB-βRAB573、pGL2-promoter/SB-βRHfB263），분별장기도입Hela세포중，채용β-반유당감매보고기인위전이효솔내대조，공백적형광소매기인재체위기출대조，진행형광소매활성비교。결과 3개기인편단재체구건부합설계，기상대억제활성분별위59.74%、80.97%、79.42%；결론 초보제시인류β-기인5’모위상유-2132～-1822bp편단급-1822～-15559bp편단내가능존재유기부조공작용적순식작용원건（억제자），이-2277bp～-2132bp편단간미검출억제자혹증강자활성존재。차초보결과상수진일보연구증실화천명기결구여공능적관계。
The luciferase reporter gene(Luc) recombinant vectors (pGL2-promoter/SB-βRHB734、pGL2-promoter/SB-βRAB573 and pGL2-promoter/SB-βRHfB263) were constructed ,which contain different length of the 5'flankling sequences of β-globin gene by using deletion and recombinant DNA technique.Then these recombinant vectors were transfected into the Hela cells separately. The expressed luciferase activities of the recombinant vectors were measured by counting the single photon intensity (cpm)in the Liquid scintillometer, and the gene transfer efficiency was calibrated by transfection of a recombinant vector of the β-galactosidase gene and measurement of its expression activity at the same time with the luciferase repoter gene. The results show that a silencer activity onto the luc gene expression may be possible present in both of the -2 132～-1 822 and -1 822～-1 559 bp regions 5'-upstream to the cap site of human β-globin gene , but there is neither silencer nor enhancer activation detectable in-2277～-2132bp fragment.The inhibitilities of three vector are 59.74%，80.97%，79.42%.
