中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
1999年
2期
147-151
,共5页
沙门氏菌%PCR%DNA探针
沙門氏菌%PCR%DNA探針
사문씨균%PCR%DNA탐침
参照文献报道的根据沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因片段所设计的引物序列,合成了1对长25 bp的引物.对沙门氏菌属A～F各群中共16株沙门氏标准菌株和其他12株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增,结果沙门氏菌PCR产物都出现495 bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有沙门氏菌属特异性.选用Hind Ⅲ内切酶对PCR产物直接进行酶切,紫外灯下可见2条电泳带,其长度(大片段长度为314 bp,小片段为180 bp)与目的基因序列相符合.用低融点琼脂糖对PCR产物电泳回收、纯化,采用随机引物法以α-32P-dCTP标记探针,分别与沙门氏菌和非沙门氏菌靶DNA进行Dot blot和Southern blot,杂交后用普通X光胶片自显影,结果探针只与沙门氏菌DNA杂交,并出现很强的杂交信号,而与非沙门氏菌不杂交,证实扩增产物是目的基因片段.以稀释的核酸分子量标准λDNA/Hind Ⅲ酶切片段作对照,将抽提的沙门氏菌DNA作系列稀释,测定该PCR体系的敏感度,结果表明,此PCR体系能检出30 pg以上的细菌DNA.采用上述PCR技术,对沙门氏菌人工感染发病、自然发病小鼠、雏鸡的血液、脏器、粪便进行检测,均出现阳性结果.本研究表明,沙门氏菌PCR检测方法是一种快速、敏感和高度特异的诊断方法,可推广应用.
參照文獻報道的根據沙門氏菌組氨痠轉運操縱子基因片段所設計的引物序列,閤成瞭1對長25 bp的引物.對沙門氏菌屬A～F各群中共16株沙門氏標準菌株和其他12株非沙門氏菌標準菌株進行DNA抽提擴增,結果沙門氏菌PCR產物都齣現495 bp的特異性DNA擴增帶,而非沙門氏菌均未齣現擴增條帶,證明這對引物具有沙門氏菌屬特異性.選用Hind Ⅲ內切酶對PCR產物直接進行酶切,紫外燈下可見2條電泳帶,其長度(大片段長度為314 bp,小片段為180 bp)與目的基因序列相符閤.用低融點瓊脂糖對PCR產物電泳迴收、純化,採用隨機引物法以α-32P-dCTP標記探針,分彆與沙門氏菌和非沙門氏菌靶DNA進行Dot blot和Southern blot,雜交後用普通X光膠片自顯影,結果探針隻與沙門氏菌DNA雜交,併齣現很彊的雜交信號,而與非沙門氏菌不雜交,證實擴增產物是目的基因片段.以稀釋的覈痠分子量標準λDNA/Hind Ⅲ酶切片段作對照,將抽提的沙門氏菌DNA作繫列稀釋,測定該PCR體繫的敏感度,結果錶明,此PCR體繫能檢齣30 pg以上的細菌DNA.採用上述PCR技術,對沙門氏菌人工感染髮病、自然髮病小鼠、雛鷄的血液、髒器、糞便進行檢測,均齣現暘性結果.本研究錶明,沙門氏菌PCR檢測方法是一種快速、敏感和高度特異的診斷方法,可推廣應用.
삼조문헌보도적근거사문씨균조안산전운조종자기인편단소설계적인물서렬,합성료1대장25 bp적인물.대사문씨균속A～F각군중공16주사문씨표준균주화기타12주비사문씨균표준균주진행DNA추제확증,결과사문씨균PCR산물도출현495 bp적특이성DNA확증대,이비사문씨균균미출현확증조대,증명저대인물구유사문씨균속특이성.선용Hind Ⅲ내절매대PCR산물직접진행매절,자외등하가견2조전영대,기장도(대편단장도위314 bp,소편단위180 bp)여목적기인서렬상부합.용저융점경지당대PCR산물전영회수、순화,채용수궤인물법이α-32P-dCTP표기탐침,분별여사문씨균화비사문씨균파DNA진행Dot blot화Southern blot,잡교후용보통X광효편자현영,결과탐침지여사문씨균DNA잡교,병출현흔강적잡교신호,이여비사문씨균불잡교,증실확증산물시목적기인편단.이희석적핵산분자량표준λDNA/Hind Ⅲ매절편단작대조,장추제적사문씨균DNA작계렬희석,측정해PCR체계적민감도,결과표명,차PCR체계능검출30 pg이상적세균DNA.채용상술PCR기술,대사문씨균인공감염발병、자연발병소서、추계적혈액、장기、분편진행검측,균출현양성결과.본연구표명,사문씨균PCR검측방법시일충쾌속、민감화고도특이적진단방법,가추엄응용.
