中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
5期
594-599
,共6页
徐云剑%苏力坦·阿巴白克力%吉栩%朱玉贤
徐雲劍%囌力坦·阿巴白剋力%吉栩%硃玉賢
서운검%소력탄·아파백극력%길허%주옥현
PPF1基因%原核表达%融合蛋白%多克隆抗体
PPF1基因%原覈錶達%融閤蛋白%多剋隆抗體
PPF1기인%원핵표체%융합단백%다극륭항체
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一.以pSK-PPF1为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段,称为PPFC.进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM-T-easy,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX-4T-1载体中,构建成表达质粒pGEX-4T-PPFC.在BL21细胞中经IPTG诱导表达,得到GST-PPFC融合蛋白.用GST亲和柱纯化得到PPFC蛋白,将其作为抗原得到兔源的多克隆抗体.Western杂交分析表明所得到的抗体具有较强的特异性,ELISA分析证实其效价为106.该抗体的获得为用免疫沉淀等免疫分析技术研究PPF1与其它蛋白质的相互作用,从而阐明PPF1在延缓G2豌豆衰老中的分子机制提供了可能.
PPF1是與G2豌豆短日不衰老現象緊密相關的基因之一.以pSK-PPF1為模闆,用PCR方法得到瞭編碼該蛋白C耑的基因片段,稱為PPFC.進一步將該基因片段剋隆到中間載體pGEM-T-easy,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX-4T-1載體中,構建成錶達質粒pGEX-4T-PPFC.在BL21細胞中經IPTG誘導錶達,得到GST-PPFC融閤蛋白.用GST親和柱純化得到PPFC蛋白,將其作為抗原得到兔源的多剋隆抗體.Western雜交分析錶明所得到的抗體具有較彊的特異性,ELISA分析證實其效價為106.該抗體的穫得為用免疫沉澱等免疫分析技術研究PPF1與其它蛋白質的相互作用,從而闡明PPF1在延緩G2豌豆衰老中的分子機製提供瞭可能.
PPF1시여G2완두단일불쇠로현상긴밀상관적기인지일.이pSK-PPF1위모판,용PCR방법득도료편마해단백C단적기인편단,칭위PPFC.진일보장해기인편단극륭도중간재체pGEM-T-easy,재매절득도PPFC편단삽입도pGEX-4T-1재체중,구건성표체질립pGEX-4T-PPFC.재BL21세포중경IPTG유도표체,득도GST-PPFC융합단백.용GST친화주순화득도PPFC단백,장기작위항원득도토원적다극륭항체.Western잡교분석표명소득도적항체구유교강적특이성,ELISA분석증실기효개위106.해항체적획득위용면역침정등면역분석기술연구PPF1여기타단백질적상호작용,종이천명PPF1재연완G2완두쇠로중적분자궤제제공료가능.
