CAJ | 학술논문

本实验主要研究内毒素、iNOS抑制剂硫酸甲基异硫脲(SMT)对活体淋巴管运动及iNOS的表达的影响，探讨iNOS、iNOS抑制剂SMT在急性内毒素血症中对淋巴微循环的作用。动物选用雄性Wistar大鼠54只，体重200-300 g。将动物分为3组：control组(n ＝18)：股静脉一次推注生理盐水(5 mL／kg体重)作对照。分别在注药后l、3、6 h 各处死6只；LPS组(n＝18)：股静脉一次推注LPS(5 mg／kg体重)，其它处理同control 组；LPS+SMT组(n＝18)：股静脉一次推注LPS(5　mg／kg体重)和SMT(10　mg／kg体重) ；其它处理同control组。动物用20％乌拉坦(7 ml／kg体重)肌肉注射麻醉。腹正中部开腹，取出肠系膜，找出一条理想的游离淋巴管，置于观察盒中，保温(32℃左右)，并定时于肠管上滴加37℃左右的台氏液以维持一定湿度，在倒置显微镜下观察并录像。将每只需观察6 h的动物镜下先稳定5 -10 min，作为正常录像，再按分组注药，观察录像6 h后，处死。根据录像资料，利用微机图像处理系统，定淋巴管、定部位测量实验用药前及用药后l 、2、3、4、5、6 h各时段各动物淋巴管管径的大小，求得平均口径(d)、最大舒张口径(b )、最小收缩管径(c)、淋巴管收缩频率(a)，计算淋巴管运动指数［收缩指数Index I＝(b 2-c2)／b2，总收缩活性指数IndexII＝(b2-c2)a／b2，淋巴管动力学指数LD-Ind ex＝(b-C)100 a／d2］。所有动物在处死后，取血静置，取血清，用一氧化氮试剂盒测定血清中NO合量。并取肠系膜进行免疫组化染色。结果：(1)LPS组的收缩频率、运动指数均比注药前显著降低(P＜ 0.05)，免疫组化染色阳性细胞数明显增多(P＜0.05)。阳性细胞为巨噬细胞和内皮细胞。血浆NO合量显著升高 (P＜0.01)。(2)SMT+LPS组的收缩频率、运动指数均与注药前相比，无显著差异( P＞0.05) 。免疫组化染色阳性细胞数及血浆NO含量与LPS组相比，均显著降低(P＜0.01)。结果说明：正常条件下，肠系膜淋巴管运动不但受自身节律的调节，还受NO的调节。LP S作用下，肠系膜淋巴管随时间延长明显扩张，运动减弱，渗出增多，与NO的生成量呈正相关。SMT能抑制iNOS的活性，内毒素血症早期应用选择性iNOS抑制剂，可维持淋巴循环于正常水平。内毒素血症中，由于iNOS过度表达，导致过量的NO产生，使淋巴管的运动异常。SMT由于能抑制iNOS，从而抑制了NO的过量产生，使淋巴管运动恢复。这可能为临床上淋巴管循环障碍及内毒素血症的治疗提供理论基础和实验依据。本實驗主要研究內毒素、iNOS抑製劑硫痠甲基異硫脲(SMT)對活體淋巴管運動及iNOS的錶達的影響，探討iNOS、iNOS抑製劑SMT在急性內毒素血癥中對淋巴微循環的作用。動物選用雄性Wistar大鼠54隻，體重200-300 g。將動物分為3組：control組(n ＝18)：股靜脈一次推註生理鹽水(5 mL／kg體重)作對照。分彆在註藥後l、3、6 h 各處死6隻；LPS組(n＝18)：股靜脈一次推註LPS(5 mg／kg體重)，其它處理同control 組；LPS+SMT組(n＝18)：股靜脈一次推註LPS(5　mg／kg體重)和SMT(10　mg／kg體重) ；其它處理同control組。動物用20％烏拉坦(7 ml／kg體重)肌肉註射痳醉。腹正中部開腹，取齣腸繫膜，找齣一條理想的遊離淋巴管，置于觀察盒中，保溫(32℃左右)，併定時于腸管上滴加37℃左右的檯氏液以維持一定濕度，在倒置顯微鏡下觀察併錄像。將每隻需觀察6 h的動物鏡下先穩定5 -10 min，作為正常錄像，再按分組註藥，觀察錄像6 h後，處死。根據錄像資料，利用微機圖像處理繫統，定淋巴管、定部位測量實驗用藥前及用藥後l 、2、3、4、5、6 h各時段各動物淋巴管管徑的大小，求得平均口徑(d)、最大舒張口徑(b )、最小收縮管徑(c)、淋巴管收縮頻率(a)，計算淋巴管運動指數［收縮指數Index I＝(b 2-c2)／b2，總收縮活性指數IndexII＝(b2-c2)a／b2，淋巴管動力學指數LD-Ind ex＝(b-C)100 a／d2］。所有動物在處死後，取血靜置，取血清，用一氧化氮試劑盒測定血清中NO閤量。併取腸繫膜進行免疫組化染色。結果：(1)LPS組的收縮頻率、運動指數均比註藥前顯著降低(P＜ 0.05)，免疫組化染色暘性細胞數明顯增多(P＜0.05)。暘性細胞為巨噬細胞和內皮細胞。血漿NO閤量顯著升高 (P＜0.01)。(2)SMT+LPS組的收縮頻率、運動指數均與註藥前相比，無顯著差異( P＞0.05) 。免疫組化染色暘性細胞數及血漿NO含量與LPS組相比，均顯著降低(P＜0.01)。結果說明：正常條件下，腸繫膜淋巴管運動不但受自身節律的調節，還受NO的調節。LP S作用下，腸繫膜淋巴管隨時間延長明顯擴張，運動減弱，滲齣增多，與NO的生成量呈正相關。SMT能抑製iNOS的活性，內毒素血癥早期應用選擇性iNOS抑製劑，可維持淋巴循環于正常水平。內毒素血癥中，由于iNOS過度錶達，導緻過量的NO產生，使淋巴管的運動異常。SMT由于能抑製iNOS，從而抑製瞭NO的過量產生，使淋巴管運動恢複。這可能為臨床上淋巴管循環障礙及內毒素血癥的治療提供理論基礎和實驗依據。
본실험주요연구내독소、iNOS억제제류산갑기이류뇨(SMT)대활체림파관운동급iNOS적 표체적영향，탐토iNOS、iNOS억제제SMT재급성내독소혈증중대림파미순배적작용。 동물선용웅성Wistar대서54지，체중200-300 g。장동물분위3조：control조(n ＝18)：고정맥일차추주생리염수(5 mL／kg체중)작대조。분별재주약후l、3、6 h 각처사6지；LPS조(n＝18)：고정맥일차추주LPS(5 mg／kg체중)，기타처리동control 조；LPS+SMT조(n＝18)：고정맥일차추주LPS(5　mg／kg체중)화SMT(10　mg／kg체중) ；기타처리 동control조。 동물용20％오랍탄(7 ml／kg체중)기육주사마취。복정중부개복，취출장계막，조출일 조이상적유리림파관，치우관찰합중，보온(32℃좌우)，병정시우장관상적가37℃좌우적태 씨액이유지일정습도，재도치현미경하관찰병록상。장매지수관찰6 h적동물경하선은정5 -10 min，작위정상록상，재안분조주약，관찰록상6 h후，처사。 근거록상자료，이용미궤도상처리계통，정림파관、정부위측량실험용약전급용약후l 、2、3、4、5、6 h각시단각동물림파관관경적대소，구득평균구경(d)、최대서장구경(b )、최소수축관경(c)、림파관수축빈솔(a)，계산림파관운동지수［수축지수Index I＝(b 2-c2)／b2，총수축활성지수IndexII＝(b2-c2)a／b2，림파관동역학지수LD-Ind ex＝(b-C)100 a／d2］。 소유동물재처사후，취혈정치，취혈청，용일양화담시제합측정혈청중NO합량。병취장 계막진행면역조화염색。 결과：(1)LPS조적수축빈솔、운동지수균비주약전현저강저(P＜ 0.05)，면역조화염색양 성세포수명현증다(P＜0.05)。양성세포위거서세포화내피세포。혈장NO합량현저승고 (P＜0.01)。(2)SMT+LPS조적수축빈솔、운동지수균여주약전상비，무현저차이( P＞0.05) 。면역조화염색양성세포수급혈장NO함량여LPS조상비，균현저강저(P＜0.01)。 결과설명：정상조건하，장계막림파관운동불단수자신절률적조절， 환수NO적조절。LP S작용하，장계막림파관수시간연장명현확장，운동감약，삼출증다，여NO적생성량정정상 관。SMT능억제iNOS적활성，내독소혈증조기응용선택성iNOS억제제，가유지림파순배우정 상수평。내독소혈증중，유우iNOS과도표체，도치과량적NO산생，사림파관적운동이상。SMT유우능 억제iNOS，종이억제료NO적과양산생，사림파관운동회복。저가능위림상상림파관순배장애 급내독소혈증적치료제공이론기출화실험의거。