CAJ | 학술논문

采用TRIzol试剂一步法所抽提的总RNA的D(260)/D(280)值为1.82,甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的28S rRNA和18S rRNA条带. 根据扩展青霉所产碱性脂肪酶(Lip PE)N末端2 0个氨基酸残基序列和真核生物mRNA3′端具有poly(A)等所提供的生物信息,采用RT-PCR技术和3′-RACE法扩增了Lip PE成熟肽编码区和3′非编码区的cDNA,直接将该PCR产物克隆至pUCm-T载体中. 序列分析表明,该碱性脂肪酶含有258个氨基酸,其中保守的五肽序列为 Gl y-His-Ser-Leu-Gly. 进一步采用ClonTech公司的SMARTTM PCR cDNA文库构建试剂盒,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段,从而完成了Lip EP完整cDNA 的分析测定. 最后将编码完整脂肪酶蛋白的cDNA克隆至pGEX-5X-3表达载体中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果表明,所表达的GST-Lip EP融合蛋白分子质量约为53 ku;免疫印迹(Western Blotting)技术证明了所克隆的cDNA确为编码扩展青霉W MC20718脂肪酶的基因.
채용TRIzol시제일보법소추제적총RNA적D(260)/D(280)치위1.82,갑철변성전영정현진핵미생물소특유적28S rRNA화18S rRNA조대. 근거확전청매소산감성지방매(Lip PE)N말단2 0개안기산잔기서렬화진핵생물mRNA3′단구유poly(A)등소제공적생물신식,채용RT-PCR기술화3′-RACE법확증료Lip PE성숙태편마구화3′비편마구적cDNA,직접장해PCR산물극륭지pUCm-T재체중. 서렬분석표명,해감성지방매함유258개안기산,기중보수적오태서렬위 Gl y-His-Ser-Leu-Gly. 진일보채용ClonTech공사적SMARTTM PCR cDNA문고구건시제합,확증、극륭화측정료자전록기시점지편마구적cDNA편단,종이완성료Lip EP완정cDNA 적분석측정. 최후장편마완정지방매단백적cDNA극륭지pGEX-5X-3표체재체중,재대장간균BL21중진행IPTG유도표체,SDS-PAGE검측결과표명,소표체적GST-Lip EP융합단백분자질량약위53 ku;면역인적(Western Blotting)기술증명료소극륭적cDNA학위편마확전청매W MC20718지방매적기인.