口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达
구제역병독비결구단백3B진핵표체재체적구건급표체
Construction and expression of FMDV non-structural protein 3B gene eukaryotic vector
  • 万方数据
    中国预防兽医学报 중국예방수의학보
    CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
    2003年 3期 168-171 ,共4页

    尤永进%葛艳%陈波%饶忠%徐泉兴%朱彩珠%张强%卢永干

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    구제역병독%비결구단백%진핵표체재체%극륭%표체
    设计、合成FMDV非结构蛋白3B基因的PCR引物,并在引物5'端和3'端分别加入含BamH I和Hind Ⅲ限制性酶切位点序列.以FMDV基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3B基因,得到的基因片段经BamH I/Hind Ⅲ双酶切后与转座载体pFASTBAC HTa连接,转化宿主菌DH10BAC,在含庆大霉素、卡那霉素、X-gal、IPTG的LB平板上37℃培养24h,提取白色菌落,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒,病毒经传代扩增后感染High 5细胞,表达目的蛋白--FMDV非结构蛋白3B.SDS-PAGE及Western Blot结果显示,本研究成功构建了Bacmid-3B重组表达载体,并在昆虫细胞中表达了NSP-3B蛋白,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应.
    설계、합성FMDV비결구단백3B기인적PCR인물,병재인물5'단화3'단분별가입함BamH I화Hind Ⅲ한제성매절위점서렬.이FMDV기인조RNA위모판,이용RT-PCR기술확증3B기인,득도적기인편단경BamH I/Hind Ⅲ쌍매절후여전좌재체pFASTBAC HTa련접,전화숙주균DH10BAC,재함경대매소、잡나매소、X-gal、IPTG적LB평판상37℃배양24h,제취백색균락,종중제취중조천사재체Bacmid 3B,여지질체공동전염곤충세포sf9,득도중조간상병독,병독경전대확증후감염High 5세포,표체목적단백--FMDV비결구단백3B.SDS-PAGE급Western Blot결과현시,본연구성공구건료Bacmid-3B중조표체재체,병재곤충세포중표체료NSP-3B단백,해표체산물가여FMDV감염적저、우혈청산생면역반응.
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