CAJ | 학술논문

构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,将NKX3.1 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中;将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3.1 cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3.1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3.1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3.1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA 48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNA ladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用.
구건인동원합기인NKX3.1 cDNA진핵표체재체,연구기재전렬선암세포PC-3、LNCaP중적표체급대세포적촉조망작용.이인전렬선암세포LNCaP세포중적총RNA위모판,RT-PCR확증NKX3.1기인전장편마편단,장NKX3.1 cDNA중조도진핵표체재체pcDNA3.1(+)중;장pcDNA3.1-NKX3.1표체재체순시전염전렬선암세포PC-3화LNCaP세포,용RT-PCR화Western인적검측NKX3.1 cDNA재전록수평화단백수평적표체;회제세포생장곡선,관찰NKX3.1대전렬선암세포증식적억제작용;용DNA/ladder화류식세포술검측NKX3.1대전렬선암세포조망적영향,진일보용RT-PCR검측조망상관기인caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin화Bcl2표체적변화.인동원합기인NKX3.1 cDNA진핵표체재체pcDNA3.1-NKX3.1경매절급측서감정정학.pcDNA3.1-NKX3.1전염PC-3화LNCaP세포후,경RT-PCR화Western인적증명능유효표체NKX3.1.생장곡선현시,전렬선암세포전염NKX3.1 cDNA후세포증식수도억제;전렬선암세포전염NKX3.1 cDNA 48h후,DNA전영정현구유조망특정적DNA ladder;류식세포술검측출현명현조망봉;RT-PCR검측조망상관기인.결과현시,caspase3、caspase8、caspase9기인표체명현증가,Bcl2기인표체명현감소.본연구성공구건료진핵표체재체pcDNA3.1-NKX3.1,전염PC-3화LNCaP세포후능유효표체,병대세포구유유도조망작용.