CAJ | 학술논문

为了解北京地区流行的人呼吸道合胞病毒(HRSV)N蛋白基因的特征,并用大肠杆菌表达获得N蛋白,从2006年1月至3月收集的首都儿科研究所附属儿童医院急性呼吸道感染患儿标本中分离到7株HRSV毒株(3株A亚型,4株B亚型),分别经RT-PCR扩增得到HRSV N蛋白全基因,克隆至pUCm-T载体中并进行测序和分析;从重组质粒pUCm-N9968中经PCR扩增获得N基因,亚克隆入原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达质粒pET30a-N9968,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导培养;SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达和抗原性.经扩增并测序,7株HRSV N蛋白基因全长均为1 176 bp,编码一个含391个氨基酸的蛋白;北京地区7株RSV分离株的N蛋白基因之间的核苷酸和推导的氨基酸同源性分别在85.4%～99.7%之间和95.4%～100%之间,进一步证明N蛋白基因的高度保守性.经诱导培养产生大量带6个组氨酸标记的重组N蛋白,主要以包涵体形式存在.N蛋白粗提物经Ni2+亲和层析获得较理想纯化.Western blot结果显示,所表达的蛋白能与特异性单克隆抗体和人血清反应.说明本研究构建的重组pET30a-N9968原核表达质粒使N蛋白获得了高效表达,并且具有特异的抗原活性,为今后进一步研究奠定了基础.
위료해북경지구류행적인호흡도합포병독(HRSV)N단백기인적특정,병용대장간균표체획득N단백,종2006년1월지3월수집적수도인과연구소부속인동의원급성호흡도감염환인표본중분리도7주HRSV독주(3주A아형,4주B아형),분별경RT-PCR확증득도HRSV N단백전기인,극륭지pUCm-T재체중병진행측서화분석;종중조질립pUCm-N9968중경PCR확증획득N기인,아극륭입원핵표체재체pET30a(+)중,득도중조표체질립pET30a-N9968,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도배양;SDS-PAGE화Western blot검측목적단백적표체화항원성.경확증병측서,7주HRSV N단백기인전장균위1 176 bp,편마일개함391개안기산적단백;북경지구7주RSV분리주적N단백기인지간적핵감산화추도적안기산동원성분별재85.4%～99.7%지간화95.4%～100%지간,진일보증명N단백기인적고도보수성.경유도배양산생대량대6개조안산표기적중조N단백,주요이포함체형식존재.N단백조제물경Ni2+친화층석획득교이상순화.Western blot결과현시,소표체적단백능여특이성단극륭항체화인혈청반응.설명본연구구건적중조pET30a-N9968원핵표체질립사N단백획득료고효표체,병차구유특이적항원활성,위금후진일보연구전정료기출.