中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
5期
358-361
,共4页
蜱抗凝血肽(TAP)%赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS)%原核表达%大肠埃希菌
蜱抗凝血肽(TAP)%賴氨痠-甘氨痠-天鼕氨痠-絲氨痠基序(KGDS)%原覈錶達%大腸埃希菌
비항응혈태(TAP)%뢰안산-감안산-천동안산-사안산기서(KGDS)%원핵표체%대장애희균
目的 设计含赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸基序(KGDS)的蜱抗凝血肽(TAP)突变体基因序列,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中与硫氧还蛋白(Trx)融合表达,以获得Trx-TAP-KGDS融合蛋白.方法 人工合成目的 基因,定向克隆于含Trx基因的高效原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-TAP-KGDS,并转化BL21感受态菌,以PCR及双酶切鉴定阳性克隆;含正确重组质粒的工程菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物. 结果 重组质粒经PCR及双酶切鉴定,均获得约209 bp的基因片段,与预期大小一致;SDS-PAGE分析显示,含重组质粒的工程菌在IPTG的诱导下高效表达分子质量单位约为24 ku的蛋白质,该蛋白以水溶性形式为主. 结论 构建了含KGDS基序的TAP突变基因的原核表达载体pET32a(+)-TAP-KGDS,并成功进行了融合表达,为进一步研究其抗凝血活性打下了基础.
目的 設計含賴氨痠-甘氨痠-天鼕氨痠-絲氨痠基序(KGDS)的蜱抗凝血肽(TAP)突變體基因序列,併在大腸埃希菌BL21(DE3)中與硫氧還蛋白(Trx)融閤錶達,以穫得Trx-TAP-KGDS融閤蛋白.方法 人工閤成目的 基因,定嚮剋隆于含Trx基因的高效原覈錶達載體pET32a(+),構建重組質粒pET32a(+)-TAP-KGDS,併轉化BL21感受態菌,以PCR及雙酶切鑒定暘性剋隆;含正確重組質粒的工程菌經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE電泳鑒定錶達產物. 結果 重組質粒經PCR及雙酶切鑒定,均穫得約209 bp的基因片段,與預期大小一緻;SDS-PAGE分析顯示,含重組質粒的工程菌在IPTG的誘導下高效錶達分子質量單位約為24 ku的蛋白質,該蛋白以水溶性形式為主. 結論 構建瞭含KGDS基序的TAP突變基因的原覈錶達載體pET32a(+)-TAP-KGDS,併成功進行瞭融閤錶達,為進一步研究其抗凝血活性打下瞭基礎.
목적 설계함뢰안산-감안산-천동안산-사안산기서(KGDS)적비항응혈태(TAP)돌변체기인서렬,병재대장애희균BL21(DE3)중여류양환단백(Trx)융합표체,이획득Trx-TAP-KGDS융합단백.방법 인공합성목적 기인,정향극륭우함Trx기인적고효원핵표체재체pET32a(+),구건중조질립pET32a(+)-TAP-KGDS,병전화BL21감수태균,이PCR급쌍매절감정양성극륭;함정학중조질립적공정균경IPTG유도표체,SDS-PAGE전영감정표체산물. 결과 중조질립경PCR급쌍매절감정,균획득약209 bp적기인편단,여예기대소일치;SDS-PAGE분석현시,함중조질립적공정균재IPTG적유도하고효표체분자질량단위약위24 ku적단백질,해단백이수용성형식위주. 결론 구건료함KGDS기서적TAP돌변기인적원핵표체재체pET32a(+)-TAP-KGDS,병성공진행료융합표체,위진일보연구기항응혈활성타하료기출.
