中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
6期
452-456
,共5页
CD4+Th细胞表位%原核表达%免疫原性%载体蛋白
CD4+Th細胞錶位%原覈錶達%免疫原性%載體蛋白
CD4+Th세포표위%원핵표체%면역원성%재체단백
目的 构建复合通用CD4Th细胞表位基因的原核表达载体,检测表达蛋白的免疫学特性,并探讨其作为载体蛋白的可能性.方法 以限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pUC19-Pep10,回收长度为650 bp左右的目的 片段.插入原核表达载体pQE30中,获得重组质粒pQE30-Pep10,转化大肠杆菌M15后进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Westem blot分析后,进行亲和层析纯化及透析复性,获得重组蛋白Pep10,将Pep10和TT分别免疫雌性BALB/c小鼠,以间接ELISA法和流式细胞术分别检测其免疫原性和淋巴细胞增殖效应.结果 SDS-PAGE显示重组蛋白Pep10相对分子质量约为23 000,表达量达41%,主要以包涵体形式表达,Western blot检测可见特异性染色条带,纯化后纯度达94%,共获得42 mg重组蛋白.其体外淋巴细胞增殖效应与TT相当,增殖指数分别为4.216和4.736,而免疫原性远低于TT,特异性IgG几何平均滴度(GMT)分别为1:15 758.65和1:67 558.81.结论 已成功构建重组原核表达载体pQE30-Pep10,并在大肠杆菌中高效表达,且表达的重组蛋白Pep10具有良好的淋巴细胞增殖效应和较低的免疫原性,有可能作为一种新型载体蛋白,用于多糖结合疫苗的研制.
目的 構建複閤通用CD4Th細胞錶位基因的原覈錶達載體,檢測錶達蛋白的免疫學特性,併探討其作為載體蛋白的可能性.方法 以限製性覈痠內切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切重組質粒pUC19-Pep10,迴收長度為650 bp左右的目的 片段.插入原覈錶達載體pQE30中,穫得重組質粒pQE30-Pep10,轉化大腸桿菌M15後進行誘導錶達.錶達產物經SDS-PAGE和Westem blot分析後,進行親和層析純化及透析複性,穫得重組蛋白Pep10,將Pep10和TT分彆免疫雌性BALB/c小鼠,以間接ELISA法和流式細胞術分彆檢測其免疫原性和淋巴細胞增殖效應.結果 SDS-PAGE顯示重組蛋白Pep10相對分子質量約為23 000,錶達量達41%,主要以包涵體形式錶達,Western blot檢測可見特異性染色條帶,純化後純度達94%,共穫得42 mg重組蛋白.其體外淋巴細胞增殖效應與TT相噹,增殖指數分彆為4.216和4.736,而免疫原性遠低于TT,特異性IgG幾何平均滴度(GMT)分彆為1:15 758.65和1:67 558.81.結論 已成功構建重組原覈錶達載體pQE30-Pep10,併在大腸桿菌中高效錶達,且錶達的重組蛋白Pep10具有良好的淋巴細胞增殖效應和較低的免疫原性,有可能作為一種新型載體蛋白,用于多糖結閤疫苗的研製.
목적 구건복합통용CD4Th세포표위기인적원핵표체재체,검측표체단백적면역학특성,병탐토기작위재체단백적가능성.방법 이한제성핵산내절매BamH Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절중조질립pUC19-Pep10,회수장도위650 bp좌우적목적 편단.삽입원핵표체재체pQE30중,획득중조질립pQE30-Pep10,전화대장간균M15후진행유도표체.표체산물경SDS-PAGE화Westem blot분석후,진행친화층석순화급투석복성,획득중조단백Pep10,장Pep10화TT분별면역자성BALB/c소서,이간접ELISA법화류식세포술분별검측기면역원성화림파세포증식효응.결과 SDS-PAGE현시중조단백Pep10상대분자질량약위23 000,표체량체41%,주요이포함체형식표체,Western blot검측가견특이성염색조대,순화후순도체94%,공획득42 mg중조단백.기체외림파세포증식효응여TT상당,증식지수분별위4.216화4.736,이면역원성원저우TT,특이성IgG궤하평균적도(GMT)분별위1:15 758.65화1:67 558.81.결론 이성공구건중조원핵표체재체pQE30-Pep10,병재대장간균중고효표체,차표체적중조단백Pep10구유량호적림파세포증식효응화교저적면역원성,유가능작위일충신형재체단백,용우다당결합역묘적연제.
