CAJ | 학술논문

目的表达、纯化重组人B7-H4IgV融合蛋白,并检测其活性.方法将人B7-H4胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达.表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析纯化,并进行Western blot鉴定.用纯化的rhB7-H4IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定小鼠抗血清的活性;免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察对肿瘤细胞生长的抑制作用.结果表达的rhB7-H4IgV蛋白约占菌体总蛋白的25%,纯化后蛋白纯度为93%,浓度约为0.5 mg/ml,与抗His单抗可产生特异性反应条带.免疫昆明小鼠产生的抗血清效价可达1:10 000,可与SP2/0肿瘤细胞结合.rhB7-H4IgV蛋白对SP2/0移植瘤生长具有一定的抑制作用.结论已成功表达并纯化了重组人B7-H4IgV融合蛋白,纯化蛋白可诱发小鼠体内免疫应答,产生的抗体能与表达B7-H4的肿瘤细胞SP2/0结合,rhB7-H4IgV蛋白在一定程度上能抑制SP2/0移植瘤的生长.
목적 표체、순화중조인B7-H4IgV융합단백,병검측기활성.방법 장인B7-H4포외편단IgV구기인삽입pQE-30원핵표체재체,전화대장간균,IPTG유도표체.표체산물경Ni2+-NTA주친화층석순화,병진행Western blot감정.용순화적rhB7-H4IgV단백면역곤명소서,경ELISA、류식세포술측정소서항혈청적활성;면역SP2/0하류소서,관찰대종류세포생장적억제작용.결과 표체적rhB7-H4IgV단백약점균체총단백적25%,순화후단백순도위93%,농도약위0.5 mg/ml,여항His단항가산생특이성반응조대.면역곤명소서산생적항혈청효개가체1:10 000,가여SP2/0종류세포결합.rhB7-H4IgV단백대SP2/0이식류생장구유일정적억제작용.결론 이성공표체병순화료중조인B7-H4IgV융합단백,순화단백가유발소서체내면역응답,산생적항체능여표체B7-H4적종류세포SP2/0결합,rhB7-H4IgV단백재일정정도상능억제SP2/0이식류적생장.