中南林业科技大学学报
中南林業科技大學學報
중남임업과기대학학보
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY OF FORESTRY & TECHNOLOGY
2009年
1期
55-59
,共5页
马涛%刘卫东%杨水莲%舒必超%刘瑞峰%谢鹏
馬濤%劉衛東%楊水蓮%舒必超%劉瑞峰%謝鵬
마도%류위동%양수련%서필초%류서봉%사붕
草业科学%狗牙根%ISSR-PCR%反应体系%优化
草業科學%狗牙根%ISSR-PCR%反應體繫%優化
초업과학%구아근%ISSR-PCR%반응체계%우화
以改良的CTAB法提取的狗牙根叶片DNA为模板,采用单因素多水平方法对狗牙根ISSR反应体系进行构建和优化,系统分析Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物和buffer这6种1SSR反应成分的浓度对扩增结果的影响,结果表明:20.0μL PCR反应体积中,20.0 ng模板DNA,0.4 μmol/L引物,0.5mmol/L Mg2+,0.05mmol/L dNTPs,0.2U TaqDNA聚合酶,2.0 μL 10×buffer.反应程序为;94℃预变性5 min;94℃变性45 s,55 C退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;再72℃延伸7 min,4℃保温.
以改良的CTAB法提取的狗牙根葉片DNA為模闆,採用單因素多水平方法對狗牙根ISSR反應體繫進行構建和優化,繫統分析Taq酶、Mg2+、模闆DNA、dNTPs、引物和buffer這6種1SSR反應成分的濃度對擴增結果的影響,結果錶明:20.0μL PCR反應體積中,20.0 ng模闆DNA,0.4 μmol/L引物,0.5mmol/L Mg2+,0.05mmol/L dNTPs,0.2U TaqDNA聚閤酶,2.0 μL 10×buffer.反應程序為;94℃預變性5 min;94℃變性45 s,55 C退火45 s,72℃延伸1.5 min,35箇循環;再72℃延伸7 min,4℃保溫.
이개량적CTAB법제취적구아근협편DNA위모판,채용단인소다수평방법대구아근ISSR반응체계진행구건화우화,계통분석Taq매、Mg2+、모판DNA、dNTPs、인물화buffer저6충1SSR반응성분적농도대확증결과적영향,결과표명:20.0μL PCR반응체적중,20.0 ng모판DNA,0.4 μmol/L인물,0.5mmol/L Mg2+,0.05mmol/L dNTPs,0.2U TaqDNA취합매,2.0 μL 10×buffer.반응정서위;94℃예변성5 min;94℃변성45 s,55 C퇴화45 s,72℃연신1.5 min,35개순배;재72℃연신7 min,4℃보온.
