生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
40-44
,共5页
刘延杰%林鲁霞%宋长征%季虹%荣海钦
劉延傑%林魯霞%宋長徵%季虹%榮海欽
류연걸%림로하%송장정%계홍%영해흠
Exendin -4:串联表达%纯化%胰岛素释放试验%2型糖尿病
Exendin -4:串聯錶達%純化%胰島素釋放試驗%2型糖尿病
Exendin -4:천련표체%순화%이도소석방시험%2형당뇨병
目的:完成钝尾毒蜥Exendin -4基因在大肠杆菌中的串联高效表达.方法:按照大肠杆菌偏爱密码子设计Exendin -4基因片段,利用同尾酶构建多拷贝串联的表达载体,于大肠杆菌BL21( DE3)中诱导表达,SDS - PAGE鉴定结果,表达产物Ni柱纯化后肠激酶切割,高效液相色谱及四级杆-飞行时间质谱纯化、鉴定,确定目标产物,作用胰岛瘤细胞INS -1检测胰岛素释放活性.结果:成功构建重组载体pET28a -(Exendin -4)n(n=2,4,6),且均获得可溶性表达产物,重组表达蛋白经切割、纯化、鉴定和制备,最终得到纯度98%的Exendin -4,其具有与标准品相似的促葡萄糖刺激的胰岛素释放活性.结论:试验成功利用串联表达方式制备有活性的Exendin -4,为下一步2型糖尿病治疗药物的研究奠定了基础.
目的:完成鈍尾毒蜥Exendin -4基因在大腸桿菌中的串聯高效錶達.方法:按照大腸桿菌偏愛密碼子設計Exendin -4基因片段,利用同尾酶構建多拷貝串聯的錶達載體,于大腸桿菌BL21( DE3)中誘導錶達,SDS - PAGE鑒定結果,錶達產物Ni柱純化後腸激酶切割,高效液相色譜及四級桿-飛行時間質譜純化、鑒定,確定目標產物,作用胰島瘤細胞INS -1檢測胰島素釋放活性.結果:成功構建重組載體pET28a -(Exendin -4)n(n=2,4,6),且均穫得可溶性錶達產物,重組錶達蛋白經切割、純化、鑒定和製備,最終得到純度98%的Exendin -4,其具有與標準品相似的促葡萄糖刺激的胰島素釋放活性.結論:試驗成功利用串聯錶達方式製備有活性的Exendin -4,為下一步2型糖尿病治療藥物的研究奠定瞭基礎.
목적:완성둔미독석Exendin -4기인재대장간균중적천련고효표체.방법:안조대장간균편애밀마자설계Exendin -4기인편단,이용동미매구건다고패천련적표체재체,우대장간균BL21( DE3)중유도표체,SDS - PAGE감정결과,표체산물Ni주순화후장격매절할,고효액상색보급사급간-비행시간질보순화、감정,학정목표산물,작용이도류세포INS -1검측이도소석방활성.결과:성공구건중조재체pET28a -(Exendin -4)n(n=2,4,6),차균획득가용성표체산물,중조표체단백경절할、순화、감정화제비,최종득도순도98%적Exendin -4,기구유여표준품상사적촉포도당자격적이도소석방활성.결론:시험성공이용천련표체방식제비유활성적Exendin -4,위하일보2형당뇨병치료약물적연구전정료기출.
