生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
3期
27-30
,共4页
梁昌镛%张高瞻%赵淑玲%李敏%戴雪娟%侯艳玲
樑昌鏞%張高瞻%趙淑玲%李敏%戴雪娟%侯豔玲
량창용%장고첨%조숙령%리민%대설연%후염령
苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒%P6.9蛋白%原核表达%抗体%Pulldown
苜蓿銀紋夜蛾覈多角體病毒%P6.9蛋白%原覈錶達%抗體%Pulldown
목숙은문야아핵다각체병독%P6.9단백%원핵표체%항체%Pulldown
目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作.方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL - c2x、pGEX -4T-1、pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.选取可溶性较好的融合蛋白纯化后免疫家兔制备抗体.然后利用该抗体进行Western blot检测、分析P6.9的自身互作.结果:构建了pMAL-P6.9、pGEX -P6.9、pET-P6.9三种原核表达质粒,分别在大肠杆菌中经IPTG诱导表达产生了与预期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9 (32.9kDa)、HIS-P6.9 (12.5kDa)融合蛋白.制备了P6.9的多克隆抗体,能与P6.9蛋白发生特异反应.Pull - down结果表明P6.9自身互作.结论:获得了兔抗P6.9的多克隆抗体,为深入研究P6.9的功能提供了检测工具.证明了P6.9之间的互作,说明该蛋白功能的发挥可能是通过多聚体起作用的.
目的:在大腸桿菌中錶達苜蓿銀紋夜蛾覈多角體病毒P6.9蛋白併製備抗體,研究P6.9的自身互作.方法:用PCR方法擴增p6.9基因,將其分彆剋隆到原覈錶達載體pMAL - c2x、pGEX -4T-1、pET28a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達.選取可溶性較好的融閤蛋白純化後免疫傢兔製備抗體.然後利用該抗體進行Western blot檢測、分析P6.9的自身互作.結果:構建瞭pMAL-P6.9、pGEX -P6.9、pET-P6.9三種原覈錶達質粒,分彆在大腸桿菌中經IPTG誘導錶達產生瞭與預期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9 (32.9kDa)、HIS-P6.9 (12.5kDa)融閤蛋白.製備瞭P6.9的多剋隆抗體,能與P6.9蛋白髮生特異反應.Pull - down結果錶明P6.9自身互作.結論:穫得瞭兔抗P6.9的多剋隆抗體,為深入研究P6.9的功能提供瞭檢測工具.證明瞭P6.9之間的互作,說明該蛋白功能的髮揮可能是通過多聚體起作用的.
목적:재대장간균중표체목숙은문야아핵다각체병독P6.9단백병제비항체,연구P6.9적자신호작.방법:용PCR방법확증p6.9기인,장기분별극륭도원핵표체재체pMAL - c2x、pGEX -4T-1、pET28a중,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체.선취가용성교호적융합단백순화후면역가토제비항체.연후이용해항체진행Western blot검측、분석P6.9적자신호작.결과:구건료pMAL-P6.9、pGEX -P6.9、pET-P6.9삼충원핵표체질립,분별재대장간균중경IPTG유도표체산생료여예기분자량상부적MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9 (32.9kDa)、HIS-P6.9 (12.5kDa)융합단백.제비료P6.9적다극륭항체,능여P6.9단백발생특이반응.Pull - down결과표명P6.9자신호작.결론:획득료토항P6.9적다극륭항체,위심입연구P6.9적공능제공료검측공구.증명료P6.9지간적호작,설명해단백공능적발휘가능시통과다취체기작용적.
