CAJ | 학술논문

在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率.本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg2+及引物浓度、改变目标片段CEL Ⅰ酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系.在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳；在设定的浓度范围内dNTP和Mg2-浓度对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带.引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L.20μl酶切体系中,最佳CELⅠ酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CELⅠ缓冲液.最终在小麦中建立起了基于CEL Ⅰ酶切的高通量TILLING筛选技术体系.
재소맥중건립은정적기우CELⅠ매절적목적기인돌변위점검측기술,유조우고통량감정목적기인편단적점돌변급제고돌변검측효솔.본연구이동소맥품충신맥18공간유변SP2군체위재료,이소맥나질기인Waxy위목표편단,통과우화기인조DNA제취방법、조정PCR반응체계중dNTP、Mg2+급인물농도、개변목표편단CEL Ⅰ매절완충액성분,이급조정순화과정중적공기상대습도등방식,우화료소맥TILLING기술체계.재이용PVP-40법제취DNA과정중,연마기진동빈솔제고도30/s,KAc용액적반응시간연신위20min시,기인조DNA질량화순도최가；재설정적농도범위내dNTP화Mg2-농도대산물영향차이불명현,균능고효확증출목적조대.인물농도대산물영향차이현저,최가인물농도위0.4μmol/L.20μl매절체계중,최가CELⅠ매농도위0.1U차이용초순수대체CELⅠ완충액.최종재소맥중건립기료기우CEL Ⅰ매절적고통량TILLING사선기술체계.