中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2005年
12期
1438-1441
,共4页
唐世杰%谢思田%胡素銮%肖志强%申纪奎%易红
唐世傑%謝思田%鬍素鑾%肖誌彊%申紀奎%易紅
당세걸%사사전%호소란%초지강%신기규%역홍
转化生长因子β3%基因重组%成纤维细胞
轉化生長因子β3%基因重組%成纖維細胞
전화생장인자β3%기인중조%성섬유세포
目的为研究成纤维细胞基因转染的可行性创造条件,从而为转化生长因子(TGF)β3转基因治疗创面与病理性瘢痕的研究奠定基础.方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3.1(一)-hTGFβ3真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导质粒转染NIH3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGFβ3 mRNA在真核细胞中的表达.结果重组真核表达载体pcDNA 3.1(-)-hTGFβ3经限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ酶切,电泳后显示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5.40kb的pcDNA 3.1(-)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3.1(-)-hTGFβ3真核表达载体构建成功,经RT-PCR检测了hTGF83在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染NIH3T3细胞后hTGFβ3 mRNA的表达明显增强.结论重组真核表达载体构建正确,并能在NIH3T3成纤维细胞中表达hTGFFβ3mRNA,为其在创面与病理性瘢痕的转基因治疗奠定了基础.
目的為研究成纖維細胞基因轉染的可行性創造條件,從而為轉化生長因子(TGF)β3轉基因治療創麵與病理性瘢痕的研究奠定基礎.方法應用基因重組技術和限製性內切酶酶切構建併鑒定pcDNA3.1(一)-hTGFβ3真覈錶達載體,經脂質體LipofectamineTM 2000介導質粒轉染NIH3T3細胞後應用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測hTGFβ3 mRNA在真覈細胞中的錶達.結果重組真覈錶達載體pcDNA 3.1(-)-hTGFβ3經限製性內切酶BamHⅠ、HindⅢ酶切,電泳後顯示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5.40kb的pcDNA 3.1(-)載體片段,測序證實酶切片段與GenBank中登記的TGFβ3全長序列相同,證實pcDNA3.1(-)-hTGFβ3真覈錶達載體構建成功,經RT-PCR檢測瞭hTGF83在轉錄水平mRNA的錶達情況,錶明質粒轉染NIH3T3細胞後hTGFβ3 mRNA的錶達明顯增彊.結論重組真覈錶達載體構建正確,併能在NIH3T3成纖維細胞中錶達hTGFFβ3mRNA,為其在創麵與病理性瘢痕的轉基因治療奠定瞭基礎.
목적위연구성섬유세포기인전염적가행성창조조건,종이위전화생장인자(TGF)β3전기인치료창면여병이성반흔적연구전정기출.방법응용기인중조기술화한제성내절매매절구건병감정pcDNA3.1(일)-hTGFβ3진핵표체재체,경지질체LipofectamineTM 2000개도질립전염NIH3T3세포후응용역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측hTGFβ3 mRNA재진핵세포중적표체.결과중조진핵표체재체pcDNA 3.1(-)-hTGFβ3경한제성내절매BamHⅠ、HindⅢ매절,전영후현시1 253 bp적hTGFβ3목적편단화5.40kb적pcDNA 3.1(-)재체편단,측서증실매절편단여GenBank중등기적TGFβ3전장서렬상동,증실pcDNA3.1(-)-hTGFβ3진핵표체재체구건성공,경RT-PCR검측료hTGF83재전록수평mRNA적표체정황,표명질립전염NIH3T3세포후hTGFβ3 mRNA적표체명현증강.결론중조진핵표체재체구건정학,병능재NIH3T3성섬유세포중표체hTGFFβ3mRNA,위기재창면여병이성반흔적전기인치료전정료기출.
