吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2007年
6期
997-1000,封2
,共5页
于音%赵刚%许侃%房学迅%赵丽纯
于音%趙剛%許侃%房學迅%趙麗純
우음%조강%허간%방학신%조려순
内皮,血管%内皮生长因子%骨髓祖代细胞%转染
內皮,血管%內皮生長因子%骨髓祖代細胞%轉染
내피,혈관%내피생장인자%골수조대세포%전염
目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染兔骨髓间充质干细胞(MSCs)后的表达和分泌情况,为构建一种血供丰富、成骨能力及骨块存活能力更强的组织工程化人工颅骨奠定实验室基础.方法:应用基因重组技术,将VEGF165基因全长片段克隆于真核表达载体pcDNA3中,构建pcDNA3-VEGF165真核表达质粒;应用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将pcDNA3-VEGF165真核表达质粒转染进入兔骨髓间充质干细胞中;利用RT-PCR及Western blotting方法检测VEGF基因在MSCs中的表达情况.结果:构建的真核表达质粒-pcDNA3-VEGF165经双酶切后分别在5 400 bp和600 bp处出现条带,证实其构建成功;成功进行了兔MSCs的原代及传代培养,并建立兔MSCs库,原代细胞初为淋巴细胞样小圆细胞,此后逐渐变为圆形、梭形或蝌不规则形,而传代细胞则变为形态更均一、排列更有序的成纤维细胞样细胞;RT-PCR及Western blotting检测到瞬时转染后的细胞有VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达.结论:pcDNA3-VEGF165真核表达质粒通过脂质体能够有效转染兔MSCs,转染后的细胞具有表达VEGF蛋白的能力.
目的:研究血管內皮細胞生長因子(VEGF)基因轉染兔骨髓間充質榦細胞(MSCs)後的錶達和分泌情況,為構建一種血供豐富、成骨能力及骨塊存活能力更彊的組織工程化人工顱骨奠定實驗室基礎.方法:應用基因重組技術,將VEGF165基因全長片段剋隆于真覈錶達載體pcDNA3中,構建pcDNA3-VEGF165真覈錶達質粒;應用暘離子脂質體介導的基因轉染技術,將pcDNA3-VEGF165真覈錶達質粒轉染進入兔骨髓間充質榦細胞中;利用RT-PCR及Western blotting方法檢測VEGF基因在MSCs中的錶達情況.結果:構建的真覈錶達質粒-pcDNA3-VEGF165經雙酶切後分彆在5 400 bp和600 bp處齣現條帶,證實其構建成功;成功進行瞭兔MSCs的原代及傳代培養,併建立兔MSCs庫,原代細胞初為淋巴細胞樣小圓細胞,此後逐漸變為圓形、梭形或蝌不規則形,而傳代細胞則變為形態更均一、排列更有序的成纖維細胞樣細胞;RT-PCR及Western blotting檢測到瞬時轉染後的細胞有VEGF mRNA及VEGF蛋白的錶達.結論:pcDNA3-VEGF165真覈錶達質粒通過脂質體能夠有效轉染兔MSCs,轉染後的細胞具有錶達VEGF蛋白的能力.
목적:연구혈관내피세포생장인자(VEGF)기인전염토골수간충질간세포(MSCs)후적표체화분비정황,위구건일충혈공봉부、성골능력급골괴존활능력경강적조직공정화인공로골전정실험실기출.방법:응용기인중조기술,장VEGF165기인전장편단극륭우진핵표체재체pcDNA3중,구건pcDNA3-VEGF165진핵표체질립;응용양리자지질체개도적기인전염기술,장pcDNA3-VEGF165진핵표체질립전염진입토골수간충질간세포중;이용RT-PCR급Western blotting방법검측VEGF기인재MSCs중적표체정황.결과:구건적진핵표체질립-pcDNA3-VEGF165경쌍매절후분별재5 400 bp화600 bp처출현조대,증실기구건성공;성공진행료토MSCs적원대급전대배양,병건립토MSCs고,원대세포초위림파세포양소원세포,차후축점변위원형、사형혹과불규칙형,이전대세포칙변위형태경균일、배렬경유서적성섬유세포양세포;RT-PCR급Western blotting검측도순시전염후적세포유VEGF mRNA급VEGF단백적표체.결론:pcDNA3-VEGF165진핵표체질립통과지질체능구유효전염토MSCs,전염후적세포구유표체VEGF단백적능력.
