中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2008年
1期
11-18
,共8页
张然星%李宓%张文健%顾锋%门秀丽%叶丽亚%房青%徐梅%高福云%娄晋宁
張然星%李宓%張文健%顧鋒%門秀麗%葉麗亞%房青%徐梅%高福雲%婁晉寧
장연성%리복%장문건%고봉%문수려%협려아%방청%서매%고복운%루진저
模型,生物学%肝,人工%基因转移技术%肝细胞%肝功能衰竭
模型,生物學%肝,人工%基因轉移技術%肝細胞%肝功能衰竭
모형,생물학%간,인공%기인전이기술%간세포%간공능쇠갈
目的 建立永生化人肝细胞系 (IHCL),评价其作为制备生物人工肝细胞材料的可行性.方法 利用基因转移技术对原代培养的人肝细胞转染永生化基因猴病毒 40 大 T 抗原和人端粒酶逆转录酶,建立IHCL.以噻唑蓝法测定 IHCL 细胞生长曲线:流式细胞仪分析细胞增殖周期;裸鼠皮肤和肝脏局部接种观察细胞致瘤性;RT-PCR 检测肝细胞相关基因 mRNA 表达;蛋白质印迹法检测肝功能相关蛋白的表达.应用 Cytodex 3微载体培养 IHCL,分析细胞的生长状态和细胞密度.将 IHCL 细胞分别与 5 例重症肝功能衰竭患者的血清共培养,培养前后检测血清中胆红素和尿素氮水平,评价 IHCL 的解毒功能.结果 所建立的 IHCL 具有原代肝细胞的形态,并具有较好的增殖能力,细胞已经传代超过 80 次.IHCL 细胞以 DNA 二倍体整数倍方式增殖,细胞倍增周期为 38 h.裸鼠接种 IHCL 部位均未见肿瘤生长.RT-PCR 检测显示IHCL 细胞表达α1-抗胰蛋白酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶、谷胺酰胺合成酶和谷胱甘肽硫转移酶的 mRNA;蛋白质印迹分析证实 IHCL 细胞表达这 4 种蛋白.IHCL细胞可以在微载体上贴附生长,细胞密度可以达到2.86×106个/ml.将 IHCL 细胞与重症肝功能衰竭患者血清共培养 12、24 和 48 h 后,血清中总胆红素由(346±94)μmol/L分别下降至(330±97)、(315±97)和(295±100)μmol/L,直接胆红素由(243±70)μmol/L,下降至(218±76)、(198±79)和(184±75)μmol/L,,24、48 h与共培养前比较差异均有统计学意义(P＜0.05);而尿素氮进行性地升高,由(6.6±0.9)μmol/L 分别升高至(9.0±0.9)、(9.9±1.1)和(12.5±1.6)μmol/L,3个时间点与共培养前比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 所建立的IHCL细胞系具有正常人肝细胞的基本生物学特性和主要的功能特性,具备成为生物人工肝细胞材料的可行性.
目的 建立永生化人肝細胞繫 (IHCL),評價其作為製備生物人工肝細胞材料的可行性.方法 利用基因轉移技術對原代培養的人肝細胞轉染永生化基因猴病毒 40 大 T 抗原和人耑粒酶逆轉錄酶,建立IHCL.以噻唑藍法測定 IHCL 細胞生長麯線:流式細胞儀分析細胞增殖週期;裸鼠皮膚和肝髒跼部接種觀察細胞緻瘤性;RT-PCR 檢測肝細胞相關基因 mRNA 錶達;蛋白質印跡法檢測肝功能相關蛋白的錶達.應用 Cytodex 3微載體培養 IHCL,分析細胞的生長狀態和細胞密度.將 IHCL 細胞分彆與 5 例重癥肝功能衰竭患者的血清共培養,培養前後檢測血清中膽紅素和尿素氮水平,評價 IHCL 的解毒功能.結果 所建立的 IHCL 具有原代肝細胞的形態,併具有較好的增殖能力,細胞已經傳代超過 80 次.IHCL 細胞以 DNA 二倍體整數倍方式增殖,細胞倍增週期為 38 h.裸鼠接種 IHCL 部位均未見腫瘤生長.RT-PCR 檢測顯示IHCL 細胞錶達α1-抗胰蛋白酶、尿苷二燐痠葡萄糖醛痠基轉移酶、穀胺酰胺閤成酶和穀胱甘肽硫轉移酶的 mRNA;蛋白質印跡分析證實 IHCL 細胞錶達這 4 種蛋白.IHCL細胞可以在微載體上貼附生長,細胞密度可以達到2.86×106箇/ml.將 IHCL 細胞與重癥肝功能衰竭患者血清共培養 12、24 和 48 h 後,血清中總膽紅素由(346±94)μmol/L分彆下降至(330±97)、(315±97)和(295±100)μmol/L,直接膽紅素由(243±70)μmol/L,下降至(218±76)、(198±79)和(184±75)μmol/L,,24、48 h與共培養前比較差異均有統計學意義(P＜0.05);而尿素氮進行性地升高,由(6.6±0.9)μmol/L 分彆升高至(9.0±0.9)、(9.9±1.1)和(12.5±1.6)μmol/L,3箇時間點與共培養前比較差異均有統計學意義(P＜0.01).結論 所建立的IHCL細胞繫具有正常人肝細胞的基本生物學特性和主要的功能特性,具備成為生物人工肝細胞材料的可行性.
목적 건립영생화인간세포계 (IHCL),평개기작위제비생물인공간세포재료적가행성.방법 이용기인전이기술대원대배양적인간세포전염영생화기인후병독 40 대 T 항원화인단립매역전록매,건립IHCL.이새서람법측정 IHCL 세포생장곡선:류식세포의분석세포증식주기;라서피부화간장국부접충관찰세포치류성;RT-PCR 검측간세포상관기인 mRNA 표체;단백질인적법검측간공능상관단백적표체.응용 Cytodex 3미재체배양 IHCL,분석세포적생장상태화세포밀도.장 IHCL 세포분별여 5 례중증간공능쇠갈환자적혈청공배양,배양전후검측혈청중담홍소화뇨소담수평,평개 IHCL 적해독공능.결과 소건립적 IHCL 구유원대간세포적형태,병구유교호적증식능력,세포이경전대초과 80 차.IHCL 세포이 DNA 이배체정수배방식증식,세포배증주기위 38 h.라서접충 IHCL 부위균미견종류생장.RT-PCR 검측현시IHCL 세포표체α1-항이단백매、뇨감이린산포도당철산기전이매、곡알선알합성매화곡광감태류전이매적 mRNA;단백질인적분석증실 IHCL 세포표체저 4 충단백.IHCL세포가이재미재체상첩부생장,세포밀도가이체도2.86×106개/ml.장 IHCL 세포여중증간공능쇠갈환자혈청공배양 12、24 화 48 h 후,혈청중총담홍소유(346±94)μmol/L분별하강지(330±97)、(315±97)화(295±100)μmol/L,직접담홍소유(243±70)μmol/L,하강지(218±76)、(198±79)화(184±75)μmol/L,,24、48 h여공배양전비교차이균유통계학의의(P＜0.05);이뇨소담진행성지승고,유(6.6±0.9)μmol/L 분별승고지(9.0±0.9)、(9.9±1.1)화(12.5±1.6)μmol/L,3개시간점여공배양전비교차이균유통계학의의(P＜0.01).결론 소건립적IHCL세포계구유정상인간세포적기본생물학특성화주요적공능특성,구비성위생물인공간세포재료적가행성.
