激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2008年
1期
7-12
,共6页
陆锦玲%杨杰%储军%曾绍群%张智红
陸錦玲%楊傑%儲軍%曾紹群%張智紅
륙금령%양걸%저군%증소군%장지홍
阿尔茨海默病%β-分泌酶%荧光能量共振转移%绿色荧光蛋白
阿爾茨海默病%β-分泌酶%熒光能量共振轉移%綠色熒光蛋白
아이자해묵병%β-분비매%형광능량공진전이%록색형광단백
β淀粉样肽(amyloid β-peptide,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimeir's disease,AD)患者脑内的异常产生和积累在AD的发病机理中扮演着重要的角色.β-分泌酶对淀粉样前体蛋白的裂解是Aβ产生的关键步骤,因此抑制β-分泌酶的活性成为AD药物治疗的一个重要策略.为了检测β-分泌酶的活性,应用基因工程技术将β-分泌酶作用底物序列(NFEV)的两端分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的颜色突变体一青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)相连,构建了一个基于GFP的荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针.荧光光谱分析结果显示,该荧光融合蛋白中CFP和YFP之间存在着较强的FRET.而当与β-分泌酶进行孵育后,FRET逐步降低,证明该探针能被β-分泌酶酶切.SDS-PAGE分析显示探针与β-分泌酶孵育后,荧光融合蛋白由60 kD大小逐渐变成30kD大小的蛋白,表明探针被β-分泌酶酶切成CFP和YFP分子,证实了荧光光谱的结果.这些结果表明,可通过检测探针的FRET效率方便地分析β-分泌酶的活性,为进一步筛选β-分泌酶的抑制剂提供了一个平台.
β澱粉樣肽(amyloid β-peptide,Aβ)在阿爾茨海默病(Alzheimeir's disease,AD)患者腦內的異常產生和積纍在AD的髮病機理中扮縯著重要的角色.β-分泌酶對澱粉樣前體蛋白的裂解是Aβ產生的關鍵步驟,因此抑製β-分泌酶的活性成為AD藥物治療的一箇重要策略.為瞭檢測β-分泌酶的活性,應用基因工程技術將β-分泌酶作用底物序列(NFEV)的兩耑分彆與綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的顏色突變體一青色熒光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)和黃色熒光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)相連,構建瞭一箇基于GFP的熒光能量共振轉移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探針.熒光光譜分析結果顯示,該熒光融閤蛋白中CFP和YFP之間存在著較彊的FRET.而噹與β-分泌酶進行孵育後,FRET逐步降低,證明該探針能被β-分泌酶酶切.SDS-PAGE分析顯示探針與β-分泌酶孵育後,熒光融閤蛋白由60 kD大小逐漸變成30kD大小的蛋白,錶明探針被β-分泌酶酶切成CFP和YFP分子,證實瞭熒光光譜的結果.這些結果錶明,可通過檢測探針的FRET效率方便地分析β-分泌酶的活性,為進一步篩選β-分泌酶的抑製劑提供瞭一箇平檯.
β정분양태(amyloid β-peptide,Aβ)재아이자해묵병(Alzheimeir's disease,AD)환자뇌내적이상산생화적루재AD적발병궤리중분연착중요적각색.β-분비매대정분양전체단백적렬해시Aβ산생적관건보취,인차억제β-분비매적활성성위AD약물치료적일개중요책략.위료검측β-분비매적활성,응용기인공정기술장β-분비매작용저물서렬(NFEV)적량단분별여록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)적안색돌변체일청색형광단백(cyan fluorescent protein,CFP)화황색형광단백(yellow fluorescent protein,YFP)상련,구건료일개기우GFP적형광능량공진전이(fluorescence resonance energy transfer,FRET)탐침.형광광보분석결과현시,해형광융합단백중CFP화YFP지간존재착교강적FRET.이당여β-분비매진행부육후,FRET축보강저,증명해탐침능피β-분비매매절.SDS-PAGE분석현시탐침여β-분비매부육후,형광융합단백유60 kD대소축점변성30kD대소적단백,표명탐침피β-분비매매절성CFP화YFP분자,증실료형광광보적결과.저사결과표명,가통과검측탐침적FRET효솔방편지분석β-분비매적활성,위진일보사선β-분비매적억제제제공료일개평태.
