中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2008年
28期
5490-5493
,共4页
彭媛媛%邓璐霞%石艳娥%赵媛%陈军利%王薇%冯云%吴琦%王伯瑶%黄宁
彭媛媛%鄧璐霞%石豔娥%趙媛%陳軍利%王薇%馮雲%吳琦%王伯瑤%黃寧
팽원원%산로하%석염아%조원%진군리%왕미%풍운%오기%왕백요%황저
SMART技术%cDNA文库%同源重组%酵母双杂交
SMART技術%cDNA文庫%同源重組%酵母雙雜交
SMART기술%cDNA문고%동원중조%효모쌍잡교
背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台.目的:运用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA tranSC-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库.设计、时间及地点;单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成.材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供.方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5'末端添加一段5'-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA.纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒.应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库.主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定.结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整.②双链cDNA文库大小介于0.5～3 kb之间.③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2 kb之间,文库具有较好的多样性.结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库.
揹景:酵母雙雜交技術是目前應用最成功的研究蛋白質相互作用的技術平檯.目的:運用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA tranSC-ript)技術構建人肺鱗狀細胞癌徬組織的酵母雙雜交cDNA文庫.設計、時間及地點;單一樣本觀察,于2006-07/2007-01在四川大學華西基礎醫學與法醫學院病理生理學感染免疫實驗室完成.材料:人肺鱗狀細胞癌徬組織由四川大學華西醫學中心附屬第一醫院胸外科提供.方法:運用SMART技術,以純化的Poly(A)+RNA為模闆,用Powerscript逆轉錄酶進行轉錄,併在mRNA的5'末耑添加一段5'-oligo作為延伸後的模闆,從而富集全長cDNA.純化的雙鏈cDNA與線性化pGADT7-Rec質粒載體共同轉化酵母菌株感受態AH109,經胞內同源重組形成環狀文庫質粒.應用營養缺陷的方法在SD/-Leu平闆上篩選併收集所有剋隆從而穫得酵母雙雜交的人肺鱗狀細胞癌徬組織cDNA文庫.主要觀察指標:採用瓊脂糖凝膠電泳觀察人肺鱗狀細胞癌徬組織的cDNA文庫構建結果,併進行文庫容量及多態性鑒定.結果:①總RNA和mRNA純度較好,比較完整.②雙鏈cDNA文庫大小介于0.5～3 kb之間.③共穫得1.2×106轉化子,重組子不同插入片斷大小在0.3～2 kb之間,文庫具有較好的多樣性.結論:在酵母菌株AH109成功構建瞭用于酵母雙雜交的人肺鱗狀細胞癌徬組織cDNA文庫.
배경:효모쌍잡교기술시목전응용최성공적연구단백질상호작용적기술평태.목적:운용SMART(switching mechanism at 5' end of RNA tranSC-ript)기술구건인폐린상세포암방조직적효모쌍잡교cDNA문고.설계、시간급지점;단일양본관찰,우2006-07/2007-01재사천대학화서기출의학여법의학원병리생이학감염면역실험실완성.재료:인폐린상세포암방조직유사천대학화서의학중심부속제일의원흉외과제공.방법:운용SMART기술,이순화적Poly(A)+RNA위모판,용Powerscript역전록매진행전록,병재mRNA적5'말단첨가일단5'-oligo작위연신후적모판,종이부집전장cDNA.순화적쌍련cDNA여선성화pGADT7-Rec질립재체공동전화효모균주감수태AH109,경포내동원중조형성배상문고질립.응용영양결함적방법재SD/-Leu평판상사선병수집소유극륭종이획득효모쌍잡교적인폐린상세포암방조직cDNA문고.주요관찰지표:채용경지당응효전영관찰인폐린상세포암방조직적cDNA문고구건결과,병진행문고용량급다태성감정.결과:①총RNA화mRNA순도교호,비교완정.②쌍련cDNA문고대소개우0.5～3 kb지간.③공획득1.2×106전화자,중조자불동삽입편단대소재0.3～2 kb지간,문고구유교호적다양성.결론:재효모균주AH109성공구건료용우효모쌍잡교적인폐린상세포암방조직cDNA문고.
