中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
9-13
,共5页
杨辉%龚成%吴丽娟%汪仕奎%蔡剑平%胡继红
楊輝%龔成%吳麗娟%汪仕奎%蔡劍平%鬍繼紅
양휘%공성%오려연%왕사규%채검평%호계홍
弧菌%霍乱%O1%DNA探针%聚合酶链反应%霍乱毒素
弧菌%霍亂%O1%DNA探針%聚閤酶鏈反應%霍亂毒素
호균%곽란%O1%DNA탐침%취합매련반응%곽란독소
目的 建立针对O1 群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan 聚合酶链式反应快速检测体系.方法 根据O1 群霍乱弧菌主基因组O 抗原编码基因rfb-O1 和霍乱肠毒素的A 亚基编码基因ctxA 的特异性序列设计引物及TaqMan 探针,利用便携式Smartcycler II实时荧光PCR 检测平台探讨该检测体系的敏感性,用19种其他肠道致病菌及院内感染常见致病菌评价该检测体系的特异性.结果 实时荧光双重TaqMan 聚合酶链式反应快速检测体系对O1 群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0 × 102 拷贝每反应体系;对O1 群霍乱弧菌基因组DNA 的检测敏感度为1.0 × 10-1 pg 每反应体系;该检测体系在检测19 种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增;整个反应在2 h 内完成.结论本研究建立的实时荧光双重TaqMan 聚合酶链式反应检测体系可作为产毒型O1 群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,也可同时检测O1 群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力.
目的 建立針對O1 群霍亂弧菌的高敏感、高特異的實時熒光雙重TaqMan 聚閤酶鏈式反應快速檢測體繫.方法 根據O1 群霍亂弧菌主基因組O 抗原編碼基因rfb-O1 和霍亂腸毒素的A 亞基編碼基因ctxA 的特異性序列設計引物及TaqMan 探針,利用便攜式Smartcycler II實時熒光PCR 檢測平檯探討該檢測體繫的敏感性,用19種其他腸道緻病菌及院內感染常見緻病菌評價該檢測體繫的特異性.結果 實時熒光雙重TaqMan 聚閤酶鏈式反應快速檢測體繫對O1 群霍亂弧菌的檢測敏感度為1.0 × 102 拷貝每反應體繫;對O1 群霍亂弧菌基因組DNA 的檢測敏感度為1.0 × 10-1 pg 每反應體繫;該檢測體繫在檢測19 種其他腸道緻病菌或院內感染中的常見緻病菌時不存在非特異性擴增;整箇反應在2 h 內完成.結論本研究建立的實時熒光雙重TaqMan 聚閤酶鏈式反應檢測體繫可作為產毒型O1 群霍亂弧菌特異、敏感、快速的檢測手段,也可同時檢測O1 群霍亂弧菌產生霍亂腸毒素的能力.
목적 건립침대O1 군곽란호균적고민감、고특이적실시형광쌍중TaqMan 취합매련식반응쾌속검측체계.방법 근거O1 군곽란호균주기인조O 항원편마기인rfb-O1 화곽란장독소적A 아기편마기인ctxA 적특이성서렬설계인물급TaqMan 탐침,이용편휴식Smartcycler II실시형광PCR 검측평태탐토해검측체계적민감성,용19충기타장도치병균급원내감염상견치병균평개해검측체계적특이성.결과 실시형광쌍중TaqMan 취합매련식반응쾌속검측체계대O1 군곽란호균적검측민감도위1.0 × 102 고패매반응체계;대O1 군곽란호균기인조DNA 적검측민감도위1.0 × 10-1 pg 매반응체계;해검측체계재검측19 충기타장도치병균혹원내감염중적상견치병균시불존재비특이성확증;정개반응재2 h 내완성.결론본연구건립적실시형광쌍중TaqMan 취합매련식반응검측체계가작위산독형O1 군곽란호균특이、민감、쾌속적검측수단,야가동시검측O1 군곽란호균산생곽란장독소적능력.
