中国医药导报
中國醫藥導報
중국의약도보
CHINA MEDICAL HERALD
2010年
15期
20-22
,共3页
HCV-NS5A基因%原核表达%蛋白纯化
HCV-NS5A基因%原覈錶達%蛋白純化
HCV-NS5A기인%원핵표체%단백순화
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体.方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后,转化大肠埃希菌BL21中,以IPTG诱导,获得NS5A融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实融合蛋白表达的特异性.利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.纯化蛋白免疫新西兰兔,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测.结果:NS5A融合蛋白表达成功,成功获得了融合蛋白及兔抗NS5A多克隆抗体.结论:成功表达NS5A基因融合蛋白,获得高特异性、兔抗NS5A多克隆抗体,为研究NS5A基因的生物学功能提供了重要制剂.
目的:構建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原覈錶達載體,穫得高產量的純化目的蛋白,併製備其多剋隆抗體.方法:應用聚閤酶鏈反應技術,PCR擴增穫得NS5A基因,將NS5A基因插入至原覈錶達載體pET-32a(+)中,轉化大腸埃希菌DH5α提取質粒,驗證正確後,轉化大腸埃希菌BL21中,以IPTG誘導,穫得NS5A融閤蛋白的可誘導性錶達,通過SDS-PAGE電泳、Western blot免疫印跡分析證實融閤蛋白錶達的特異性.利用Ni+親和柱對錶達蛋白進行純化及柱上複性.純化蛋白免疫新西蘭兔,利用Western blot和ELISA法對多剋隆抗體進行特異性和效價檢測.結果:NS5A融閤蛋白錶達成功,成功穫得瞭融閤蛋白及兔抗NS5A多剋隆抗體.結論:成功錶達NS5A基因融閤蛋白,穫得高特異性、兔抗NS5A多剋隆抗體,為研究NS5A基因的生物學功能提供瞭重要製劑.
목적:구건병형간염병독(HCV)NS5A단백원핵표체재체,획득고산량적순화목적단백,병제비기다극륭항체.방법:응용취합매련반응기술,PCR확증획득NS5A기인,장NS5A기인삽입지원핵표체재체pET-32a(+)중,전화대장애희균DH5α제취질립,험증정학후,전화대장애희균BL21중,이IPTG유도,획득NS5A융합단백적가유도성표체,통과SDS-PAGE전영、Western blot면역인적분석증실융합단백표체적특이성.이용Ni+친화주대표체단백진행순화급주상복성.순화단백면역신서란토,이용Western blot화ELISA법대다극륭항체진행특이성화효개검측.결과:NS5A융합단백표체성공,성공획득료융합단백급토항NS5A다극륭항체.결론:성공표체NS5A기인융합단백,획득고특이성、토항NS5A다극륭항체,위연구NS5A기인적생물학공능제공료중요제제.
