医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2010年
9期
57-62
,共6页
张卉%董学君%邵健忠%项黎新
張卉%董學君%邵健忠%項黎新
장훼%동학군%소건충%항려신
人骨髓间充质干细胞%成骨细胞%脂肪细胞%软骨细胞
人骨髓間充質榦細胞%成骨細胞%脂肪細胞%軟骨細胞
인골수간충질간세포%성골세포%지방세포%연골세포
目的 改良人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)分离方法,提高细胞定向分化能力.方法 用密度梯度离心法从少量人骨髓中分离得到单个核细胞,贴壁培养3天后换液,实验组换液后72h内每隔12h更换新鲜培养液,传代时胰蛋白酶37℃作用2min后终止消化;对照组未经频繁换液,胰蛋白酶消化3min.镜下观察分离细胞的形态变化.用成骨、脂肪和软骨细胞诱导液诱导两组第3代(P3)细胞分化,碱性磷酸酶钙钴染色法、茜素红染色法和Von Kossa银染色法检测成骨细胞分化;油红O染色法检测脂肪细胞分化;阿尔新蓝染色法检测软骨细胞分化.结果 首次换液72h后,实验组与对照组相比,贴壁细胞数量较少但形态均一性高.不同染色结果显示:诱导分化成骨细胞14天时,实验组95%以上细胞分化,对照组为60%～70%;诱导分化脂肪细胞21天时,实验组50%～60%细胞分化,对照组为40%;诱导分化软骨细胞21天时,实验组90%以上细胞分化,对照组为60%～70%.结论 首次换液72h内频繁更换新鲜培养液和传代时缩短胰蛋白酶消化时间的方法能够提高hBM-MSCs的定向分化能力.
目的 改良人骨髓間充質榦細胞(hBM-MSCs)分離方法,提高細胞定嚮分化能力.方法 用密度梯度離心法從少量人骨髓中分離得到單箇覈細胞,貼壁培養3天後換液,實驗組換液後72h內每隔12h更換新鮮培養液,傳代時胰蛋白酶37℃作用2min後終止消化;對照組未經頻繁換液,胰蛋白酶消化3min.鏡下觀察分離細胞的形態變化.用成骨、脂肪和軟骨細胞誘導液誘導兩組第3代(P3)細胞分化,堿性燐痠酶鈣鈷染色法、茜素紅染色法和Von Kossa銀染色法檢測成骨細胞分化;油紅O染色法檢測脂肪細胞分化;阿爾新藍染色法檢測軟骨細胞分化.結果 首次換液72h後,實驗組與對照組相比,貼壁細胞數量較少但形態均一性高.不同染色結果顯示:誘導分化成骨細胞14天時,實驗組95%以上細胞分化,對照組為60%～70%;誘導分化脂肪細胞21天時,實驗組50%～60%細胞分化,對照組為40%;誘導分化軟骨細胞21天時,實驗組90%以上細胞分化,對照組為60%～70%.結論 首次換液72h內頻繁更換新鮮培養液和傳代時縮短胰蛋白酶消化時間的方法能夠提高hBM-MSCs的定嚮分化能力.
목적 개량인골수간충질간세포(hBM-MSCs)분리방법,제고세포정향분화능력.방법 용밀도제도리심법종소량인골수중분리득도단개핵세포,첩벽배양3천후환액,실험조환액후72h내매격12h경환신선배양액,전대시이단백매37℃작용2min후종지소화;대조조미경빈번환액,이단백매소화3min.경하관찰분리세포적형태변화.용성골、지방화연골세포유도액유도량조제3대(P3)세포분화,감성린산매개고염색법、천소홍염색법화Von Kossa은염색법검측성골세포분화;유홍O염색법검측지방세포분화;아이신람염색법검측연골세포분화.결과 수차환액72h후,실험조여대조조상비,첩벽세포수량교소단형태균일성고.불동염색결과현시:유도분화성골세포14천시,실험조95%이상세포분화,대조조위60%～70%;유도분화지방세포21천시,실험조50%～60%세포분화,대조조위40%;유도분화연골세포21천시,실험조90%이상세포분화,대조조위60%～70%.결론 수차환액72h내빈번경환신선배양액화전대시축단이단백매소화시간적방법능구제고hBM-MSCs적정향분화능력.
