湖南理工学院学报（自然科学版）
湖南理工學院學報（自然科學版）
호남리공학원학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUNAN INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE)
2010年
4期
42-45,57
,共5页
聂东宋%刘宇%冯惊涛%胡道奇
聶東宋%劉宇%馮驚濤%鬍道奇
섭동송%류우%풍량도%호도기
丙型肝炎病毒%蛋白表达%抗原检测
丙型肝炎病毒%蛋白錶達%抗原檢測
병형간염병독%단백표체%항원검측
通过RT-PCR从HCV全长基因组中分别克隆HCV核心区和NS3非结构区的部分优势表面抗原的基因片段.运用重叠延伸PCR技术将它们拼接成融合基因,将融合基因再克隆到表达栽体pTrcHis2 TOPO TA中,转化大肠杆菌Top10,阳性克隆经IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物经15%SDS-PAGE鉴定,重组蛋白经His标签纯化.经IPTG诱导可高效表达分子量约为14.4KD的融合抗原,重组蛋白主要以可溶性形式存在.经过纯化目的蛋白纯度达96.3%以上的,表达量约为550μg/mL.ELISA结果表明纯化蛋白具有良好的抗原性.
通過RT-PCR從HCV全長基因組中分彆剋隆HCV覈心區和NS3非結構區的部分優勢錶麵抗原的基因片段.運用重疊延伸PCR技術將它們拼接成融閤基因,將融閤基因再剋隆到錶達栽體pTrcHis2 TOPO TA中,轉化大腸桿菌Top10,暘性剋隆經IPTG誘導融閤蛋白的錶達,錶達產物經15%SDS-PAGE鑒定,重組蛋白經His標籤純化.經IPTG誘導可高效錶達分子量約為14.4KD的融閤抗原,重組蛋白主要以可溶性形式存在.經過純化目的蛋白純度達96.3%以上的,錶達量約為550μg/mL.ELISA結果錶明純化蛋白具有良好的抗原性.
통과RT-PCR종HCV전장기인조중분별극륭HCV핵심구화NS3비결구구적부분우세표면항원적기인편단.운용중첩연신PCR기술장타문병접성융합기인,장융합기인재극륭도표체재체pTrcHis2 TOPO TA중,전화대장간균Top10,양성극륭경IPTG유도융합단백적표체,표체산물경15%SDS-PAGE감정,중조단백경His표첨순화.경IPTG유도가고효표체분자량약위14.4KD적융합항원,중조단백주요이가용성형식존재.경과순화목적단백순도체96.3%이상적,표체량약위550μg/mL.ELISA결과표명순화단백구유량호적항원성.
