哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
6期
510-512,515
,共4页
李新禹%李淑珍%陈莉%单瑞辉%唐晓波
李新禹%李淑珍%陳莉%單瑞輝%唐曉波
리신우%리숙진%진리%단서휘%당효파
肝癌%GP73基因%克隆
肝癌%GP73基因%剋隆
간암%GP73기인%극륭
目的 重组及表达人高尔基体糖蛋白73( GP73)的融合蛋白,为建立一种新的肝癌诊断方法奠定基础.方法 提取转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞(293细胞)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出GP73基因,将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆并测序鉴定.进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达GP73融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 293细胞株提取的RNA经RT-PCR、PCR扩增后得到一条255 bp的DNA片段,经测序鉴定为GP73基因序列；并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,Western blot鉴定为GP73融合蛋白.结论 采用原核表达方法可获得高纯度的GP73融合蛋白,为进一步开发GP73诊断试剂打下基础,为肝癌的诊断开辟新途径.
目的 重組及錶達人高爾基體糖蛋白73( GP73)的融閤蛋白,為建立一種新的肝癌診斷方法奠定基礎.方法 提取轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞(293細胞)中的總RNA,應用RT-PCR、PCR等技術擴增齣GP73基因,將其分彆與帶有HIS標籤的PET-32a及GST標籤的PGEX-4T-1載體連接,轉化入DH5α菌中進行剋隆併測序鑒定.進一步構建錶達體繫,用異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,最終在BL21菌中錶達GP73融閤蛋白(分彆含有HIS,GST-Tag),併進行SDS-PAGE及Western blot鑒定.結果 293細胞株提取的RNA經RT-PCR、PCR擴增後得到一條255 bp的DNA片段,經測序鑒定為GP73基因序列；併在大腸桿菌中實現瞭可溶性高錶達,Western blot鑒定為GP73融閤蛋白.結論 採用原覈錶達方法可穫得高純度的GP73融閤蛋白,為進一步開髮GP73診斷試劑打下基礎,為肝癌的診斷開闢新途徑.
목적 중조급표체인고이기체당단백73( GP73)적융합단백,위건립일충신적간암진단방법전정기출.방법 제취전염선병독E1A기인적인신상피세포(293세포)중적총RNA,응용RT-PCR、PCR등기술확증출GP73기인,장기분별여대유HIS표첨적PET-32a급GST표첨적PGEX-4T-1재체련접,전화입DH5α균중진행극륭병측서감정.진일보구건표체체계,용이병기β-D-류대반유당감(IPTG)유도,최종재BL21균중표체GP73융합단백(분별함유HIS,GST-Tag),병진행SDS-PAGE급Western blot감정.결과 293세포주제취적RNA경RT-PCR、PCR확증후득도일조255 bp적DNA편단,경측서감정위GP73기인서렬；병재대장간균중실현료가용성고표체,Western blot감정위GP73융합단백.결론 채용원핵표체방법가획득고순도적GP73융합단백,위진일보개발GP73진단시제타하기출,위간암적진단개벽신도경.
