中国地方病学杂志
中國地方病學雜誌
중국지방병학잡지
CHINESE JOURNAL OF ENDEMIOLOGY
2006年
5期
494-496
,共3页
方政%吴建军%陈阳%黄为群%姜声扬%石佑琴
方政%吳建軍%陳暘%黃為群%薑聲颺%石祐琴
방정%오건군%진양%황위군%강성양%석우금
周期型马来丝虫%热休克蛋白质70%基因重组%基因表达
週期型馬來絲蟲%熱休剋蛋白質70%基因重組%基因錶達
주기형마래사충%열휴극단백질70%기인중조%기인표체
目的 在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70(HSP70)基因,并对表达产物进行SDS-PAGE分析.方法 以重组质粒pGEM-T-HSP70为模板,根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物,用PCR法扩增HSP70基因(包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2 198 bp),PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中,构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导GST.Tag融合蛋白的表达,经SDS-PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的 蛋白的表达水平.结果 重组表达质粒pGEX-4T-3-HSP70全长约7 200 bp,经双酶切后应得到长度为4 968 bp的载体和2 198 bp的目的 基因2个片段,1%琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符.HSP70相对分子质量(Mr)为70×103,质粒pGEX-4T-3的融合部分(GST.Tag)表达产物的Mr约为26×103,将重组质粒转化BL-21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,菌体蛋白的SDS-PAGE图谱显示,诱导组出现特异性蛋白表达条带,其Mr约100×103,与预计大小相同.目的 蛋白占菌体总蛋白的12%左右.结论 成功地构建了重组原核表达载体pGEX-4T-3-HSP70:周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达,为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础.
目的 在大腸埃希菌宿主繫統中錶達週期型馬來絲蟲熱休剋蛋白70(HSP70)基因,併對錶達產物進行SDS-PAGE分析.方法 以重組質粒pGEM-T-HSP70為模闆,根據報道的HSP70基因序列設計閤成一對引物,用PCR法擴增HSP70基因(包括完整開放讀碼框架片段及其上下遊序列共長2 198 bp),PCR產物定嚮插入原覈錶達載體pGEX-4T-3中,構建的重組質粒pGEX-4T-3-HSP70經雙酶切鑒定.將重組質粒轉化大腸埃希菌BL21(DE3),用IPTG誘導GST.Tag融閤蛋白的錶達,經SDS-PAGE分析併經凝膠圖像分析確定目的 蛋白的錶達水平.結果 重組錶達質粒pGEX-4T-3-HSP70全長約7 200 bp,經雙酶切後應得到長度為4 968 bp的載體和2 198 bp的目的 基因2箇片段,1%瓊脂糖凝膠電泳顯示結果同預期完全相符.HSP70相對分子質量(Mr)為70×103,質粒pGEX-4T-3的融閤部分(GST.Tag)錶達產物的Mr約為26×103,將重組質粒轉化BL-21(DE3)菌,經IPTG誘導錶達,菌體蛋白的SDS-PAGE圖譜顯示,誘導組齣現特異性蛋白錶達條帶,其Mr約100×103,與預計大小相同.目的 蛋白佔菌體總蛋白的12%左右.結論 成功地構建瞭重組原覈錶達載體pGEX-4T-3-HSP70:週期型馬來絲蟲HSP70基因可在大腸埃希菌中穩定錶達,為製備和純化錶達蛋白以及絲蟲病疫苗的進一步研究打下基礎.
목적 재대장애희균숙주계통중표체주기형마래사충열휴극단백70(HSP70)기인,병대표체산물진행SDS-PAGE분석.방법 이중조질립pGEM-T-HSP70위모판,근거보도적HSP70기인서렬설계합성일대인물,용PCR법확증HSP70기인(포괄완정개방독마광가편단급기상하유서렬공장2 198 bp),PCR산물정향삽입원핵표체재체pGEX-4T-3중,구건적중조질립pGEX-4T-3-HSP70경쌍매절감정.장중조질립전화대장애희균BL21(DE3),용IPTG유도GST.Tag융합단백적표체,경SDS-PAGE분석병경응효도상분석학정목적 단백적표체수평.결과 중조표체질립pGEX-4T-3-HSP70전장약7 200 bp,경쌍매절후응득도장도위4 968 bp적재체화2 198 bp적목적 기인2개편단,1%경지당응효전영현시결과동예기완전상부.HSP70상대분자질량(Mr)위70×103,질립pGEX-4T-3적융합부분(GST.Tag)표체산물적Mr약위26×103,장중조질립전화BL-21(DE3)균,경IPTG유도표체,균체단백적SDS-PAGE도보현시,유도조출현특이성단백표체조대,기Mr약100×103,여예계대소상동.목적 단백점균체총단백적12%좌우.결론 성공지구건료중조원핵표체재체pGEX-4T-3-HSP70:주기형마래사충HSP70기인가재대장애희균중은정표체,위제비화순화표체단백이급사충병역묘적진일보연구타하기출.
