CAJ | 학술논문

目的：针对突变型P53基因的致癌性，采用反义RNA技术以阻断肝细胞内源突变型P53的表达，研究对肝癌细胞生长的影响，为肝癌基因治疗提供可靠的理论基础。方法：采用定向克隆法将人野生型P53基因cDNA反向插入到哺乳动物表达载体PCR3．1的EcorRⅠ和XbaⅠ位点，构建了反义PCR3.1-P53(AS)表达载体。用免疫组化法鉴定Bel-7402肝癌细胞株为内源P53突变株，用脂质体转染法将PCR3．1-P53（AS）、PCR3．1空载体导入Bel7402细胞中，同时设Bel7402细胞对照组。用MTT法测定细胞的生长、用FCM测定细胞周期的变化。结果：转入PCR3．1-P53（AS）Bel7402细胞生长明显受到抑制，而转入PCR3．1的Bel7402细胞生长与对照组Bel7402细胞之间差异不大；FCM结果也表明转入PCR3.1-P53（AS）的细胞的生长明显被阻滞于G0／G1期，而其他两组之间则相差不大，表明可能P53反义RNA对肝癌细胞突变型P53表达的阻断，肝癌细胞显示出正常方向逆转迹象。结论：本研究结果表明，肝细胞癌内源突变型P53的表达被反义RNA抑制后，细胞增殖速度显著下降，FCM的结果也证明细胞部分受阻于G0／G1期，显示了向正常方向逆转的迹象。此研究结果即为肝癌发生提供理论基础，也为肝癌基因治疗提供新思路。
목적：침대돌변형P53기인적치암성，채용반의RNA기술이조단간세포내원돌변형P53적표체，연구대간암세포생장적영향，위간암기인치료제공가고적이론기출。방법：채용정향극륭법장인야생형P53기인cDNA반향삽입도포유동물표체재체PCR3．1적EcorRⅠ화XbaⅠ위점，구건료반의PCR3.1-P53(AS)표체재체。용면역조화법감정Bel-7402간암세포주위내원P53돌변주，용지질체전염법장PCR3．1-P53（AS）、PCR3．1공재체도입Bel7402세포중，동시설Bel7402세포대조조。용MTT법측정세포적생장、용FCM측정세포주기적변화。결과：전입PCR3．1-P53（AS）Bel7402세포생장명현수도억제，이전입PCR3．1적Bel7402세포생장여대조조Bel7402세포지간차이불대；FCM결과야표명전입PCR3.1-P53（AS）적세포적생장명현피조체우G0／G1기，이기타량조지간칙상차불대，표명가능P53반의RNA대간암세포돌변형P53표체적조단，간암세포현시출정상방향역전적상。결론：본연구결과표명，간세포암내원돌변형P53적표체피반의RNA억제후，세포증식속도현저하강，FCM적결과야증명세포부분수조우G0／G1기，현시료향정상방향역전적적상。차연구결과즉위간암발생제공이론기출，야위간암기인치료제공신사로。