CAJ | 학술논문

目的:构建胶质细胞生长因子2真核表达载体pEGFP-N1-GGF2,观察其在大鼠脊髓内的表达.方法:实验于2004-01/10在解放军第二军医大学长征医院神经外科实验室完成.出生1周SD大鼠2只和体质量250～300 g雄性成年SD大鼠12只.将成年大鼠分为对照组和实验组,每组6只.①采用反转录聚合酶链反应方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出胶质细胞生长因子2的全序列cDNA.②以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1-GGF2.③采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pEGFP-N1-GGF2混合后转染至实验组大鼠胸段脊髓组织中;对照组大鼠只注射脂质体和空白质粒pEGFP-N1的混合物.基因注射后1周,两组各取3只大鼠麻醉后取材行反转录聚合酶链反应,另取3只大鼠麻醉后取出T8,T9脊髓,冰冻切片后行荧光照相,观察绿色荧光蛋白表达情况.结果:12只大鼠均进入结果分析.①大鼠胶质细胞生长因子2 cDNA的克隆结果:成功克隆胶质细胞生长因子2 cDNA.②重组质粒pEGFP-N1-GGF2的构建结果:酶切鉴定及测序分析证实成功构建胶质细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-GGF2.③反转录聚合酶链反应证明胶质细胞生长因子mRNA表达:实验组基因转染1周后局部脊髓内胶质细胞生长因子2 mRNA的表达显著增加.④pEGFP-N1-GGF2基因体内转染结果:实验组注射局部脊髓内灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达;而对照组未见荧光蛋白表达.结论:阳离子脂质体介导胶质细胞生长因子2基因体内转染的方法是可行的,增强型绿色荧光蛋白可作为报告基因观察胶质细胞生长因子2基因在体内的表达.
목적:구건효질세포생장인자2진핵표체재체pEGFP-N1-GGF2,관찰기재대서척수내적표체.방법:실험우2004-01/10재해방군제이군의대학장정의원신경외과실험실완성.출생1주SD대서2지화체질량250～300 g웅성성년SD대서12지.장성년대서분위대조조화실험조,매조6지.①채용반전록취합매련반응방법종대서태뇌조직총RNA중확증출효질세포생장인자2적전서렬cDNA.②이융합단백방식극륭도증강형록색형광단백보고기인적진핵표체재체pEGFP-N1중,구건중조질립pEGFP-N1-GGF2.③채용기인주사법장양리자지질체Transfectam화pEGFP-N1-GGF2혼합후전염지실험조대서흉단척수조직중;대조조대서지주사지질체화공백질립pEGFP-N1적혼합물.기인주사후1주,량조각취3지대서마취후취재행반전록취합매련반응,령취3지대서마취후취출T8,T9척수,빙동절편후행형광조상,관찰록색형광단백표체정황.결과:12지대서균진입결과분석.①대서효질세포생장인자2 cDNA적극륭결과:성공극륭효질세포생장인자2 cDNA.②중조질립pEGFP-N1-GGF2적구건결과:매절감정급측서분석증실성공구건효질세포생장인자진핵표체재체pEGFP-N1-GGF2.③반전록취합매련반응증명효질세포생장인자mRNA표체:실험조기인전염1주후국부척수내효질세포생장인자2 mRNA적표체현저증가.④pEGFP-N1-GGF2기인체내전염결과:실험조주사국부척수내회질화백질신경세포내균유교다록색형광단백표체;이대조조미견형광단백표체.결론:양리자지질체개도효질세포생장인자2기인체내전염적방법시가행적,증강형록색형광단백가작위보고기인관찰효질세포생장인자2기인재체내적표체.