首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2006年
5期
623-626
,共4页
孙丽翠%王雅梅%闫豫东%张静宜%司杨%祁雅慧
孫麗翠%王雅梅%閆豫東%張靜宜%司楊%祁雅慧
손려취%왕아매%염예동%장정의%사양%기아혜
人血管内皮细胞生长因子%重组杆状病毒载体%Western blot%sf9细胞%MTT
人血管內皮細胞生長因子%重組桿狀病毒載體%Western blot%sf9細胞%MTT
인혈관내피세포생장인자%중조간상병독재체%Western blot%sf9세포%MTT
目的 构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定.方法 用Hind Ⅲ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用Hind Ⅲ酶切回收,与VEGF片段连接.NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带.将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性.结果 病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%.结论 成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用.
目的 構建含人血管內皮細胞生長因子(VEGF)基因的桿狀病毒錶達載體,併對其錶達產物的生物學活性進行測定.方法 用Hind Ⅲ對pcDNA3.1/VEGF進行酶切,迴收575 bp的VEGF片段;pFast a載體用Hind Ⅲ酶切迴收,與VEGF片段連接.NcoI酶切鑒定方嚮,得到正嚮連接重組載體pFast/VEGF;將其轉化DH10BAC感受態細胞,經卡那黴素、四環黴素、慶大黴素及藍白斑篩選得到重組桿狀病毒載體pBacmid-Fa-VEGF,PCR擴增鑒定得到單一VEGF條帶.將該病毒載體轉染sf9細胞,用噬斑篩選及SDS-PAGE和Western blot檢測VEGF錶達,併通過MTT法檢測VEGF促內皮細胞生長活性.結果 病毒液在稀釋到10-7時齣現噬斑,Western blot檢測齣現單一條帶,MTT檢測促內皮細胞生長率為19.44%.結論 成功構建瞭含VEGF基因的桿狀病毒錶達載體,且錶達產物具有顯著的促內皮細胞生長作用.
목적 구건함인혈관내피세포생장인자(VEGF)기인적간상병독표체재체,병대기표체산물적생물학활성진행측정.방법 용Hind Ⅲ대pcDNA3.1/VEGF진행매절,회수575 bp적VEGF편단;pFast a재체용Hind Ⅲ매절회수,여VEGF편단련접.NcoI매절감정방향,득도정향련접중조재체pFast/VEGF;장기전화DH10BAC감수태세포,경잡나매소、사배매소、경대매소급람백반사선득도중조간상병독재체pBacmid-Fa-VEGF,PCR확증감정득도단일VEGF조대.장해병독재체전염sf9세포,용서반사선급SDS-PAGE화Western blot검측VEGF표체,병통과MTT법검측VEGF촉내피세포생장활성.결과 병독액재희석도10-7시출현서반,Western blot검측출현단일조대,MTT검측촉내피세포생장솔위19.44%.결론 성공구건료함VEGF기인적간상병독표체재체,차표체산물구유현저적촉내피세포생장작용.
