肿瘤
腫瘤
종류
TUMOR
2006年
6期
529-532
,共4页
肺肿瘤%癌,小细胞%抗体,抗独特型%基因表达%免疫活性
肺腫瘤%癌,小細胞%抗體,抗獨特型%基因錶達%免疫活性
폐종류%암,소세포%항체,항독특형%기인표체%면역활성
目的:在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌(SCLC)抗独特型抗体3F6单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv.方法:从SCLC抗独特型抗体3F6小鼠杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录为cDNA.利用小鼠抗体骨架区共用引物,PCR扩增单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).通过人工设计的柔性连接肽(Gly4Ser)3连接构建3F6 ScFv.再将其重组到原核表达载体pQE31中,构建3F6 ScFv表达载体.转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,用Ni-NTA树脂对表达产物进行变性纯化.通过凝胶(Sephacryl S-200)柱上在位复性后,用竞争ELISA检测复性的3F6 ScFy活性.结果:获得了SCLC抗独特型抗体3F6的VH和VL基因,构建了3F6 ScFv表达质粒.在大肠杆菌中高效表达3F6 ScFv,表达蛋白的相对分子质量为32×103,以包涵体形式存在.纯化后获得较纯的3F6 ScFv蛋白,经复性后可竞争2F7抗体与SCLC NIH-H128细胞结合.结论:成功构建、表达、纯化和复性了SCLC抗独特型抗体3F6 ScFv,获得有活性的3F6 ScFv,为SCLC抗独特型抗体的进一步研究奠定了基础.
目的:在大腸桿菌中高效錶達小細胞肺癌(SCLC)抗獨特型抗體3F6單鏈抗體(ScFv),併穫得具有生物學活性的ScFv.方法:從SCLC抗獨特型抗體3F6小鼠雜交瘤細胞中提取總RNA,反轉錄為cDNA.利用小鼠抗體骨架區共用引物,PCR擴增單抗重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL).通過人工設計的柔性連接肽(Gly4Ser)3連接構建3F6 ScFv.再將其重組到原覈錶達載體pQE31中,構建3F6 ScFv錶達載體.轉化大腸桿菌M15,IPTG誘導錶達,用Ni-NTA樹脂對錶達產物進行變性純化.通過凝膠(Sephacryl S-200)柱上在位複性後,用競爭ELISA檢測複性的3F6 ScFy活性.結果:穫得瞭SCLC抗獨特型抗體3F6的VH和VL基因,構建瞭3F6 ScFv錶達質粒.在大腸桿菌中高效錶達3F6 ScFv,錶達蛋白的相對分子質量為32×103,以包涵體形式存在.純化後穫得較純的3F6 ScFv蛋白,經複性後可競爭2F7抗體與SCLC NIH-H128細胞結閤.結論:成功構建、錶達、純化和複性瞭SCLC抗獨特型抗體3F6 ScFv,穫得有活性的3F6 ScFv,為SCLC抗獨特型抗體的進一步研究奠定瞭基礎.
목적:재대장간균중고효표체소세포폐암(SCLC)항독특형항체3F6단련항체(ScFv),병획득구유생물학활성적ScFv.방법:종SCLC항독특형항체3F6소서잡교류세포중제취총RNA,반전록위cDNA.이용소서항체골가구공용인물,PCR확증단항중련가변구(VH)화경련가변구(VL).통과인공설계적유성련접태(Gly4Ser)3련접구건3F6 ScFv.재장기중조도원핵표체재체pQE31중,구건3F6 ScFv표체재체.전화대장간균M15,IPTG유도표체,용Ni-NTA수지대표체산물진행변성순화.통과응효(Sephacryl S-200)주상재위복성후,용경쟁ELISA검측복성적3F6 ScFy활성.결과:획득료SCLC항독특형항체3F6적VH화VL기인,구건료3F6 ScFv표체질립.재대장간균중고효표체3F6 ScFv,표체단백적상대분자질량위32×103,이포함체형식존재.순화후획득교순적3F6 ScFv단백,경복성후가경쟁2F7항체여SCLC NIH-H128세포결합.결론:성공구건、표체、순화화복성료SCLC항독특형항체3F6 ScFv,획득유활성적3F6 ScFv,위SCLC항독특형항체적진일보연구전정료기출.
