中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2010年
4期
271-277,后插1
,共8页
黄韧%王颖彦%邓少嫦%黄培根%张钰%刘忠华%吴玉娥%李文德%闵凡贵%刘香梅
黃韌%王穎彥%鄧少嫦%黃培根%張鈺%劉忠華%吳玉娥%李文德%閔凡貴%劉香梅
황인%왕영언%산소항%황배근%장옥%류충화%오옥아%리문덕%민범귀%류향매
H5N1禽流感病毒%动物模型%小鼠
H5N1禽流感病毒%動物模型%小鼠
H5N1금류감병독%동물모형%소서
H5N1 avian influenza virus%Animal models%Mice
目的 比较了不同遗传背景小鼠对禽流感H5N1亚型病毒的致病敏感性,为H5N1禽流感模型制作和机理研究提供依据.方法 近交系BALB/c、C57BL/6和封闭群ICR、NIH Swiss和KM Swiss共五个不同品系小鼠.每个品系实验动物30只,分接毒组20只,空白对照组10只,每组雌雄各半.病毒株为A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1),经测定TCID50为10-4.875/mL.接毒组通过鼻腔接种0.1 mL病毒液,对照组接种正常鸡胚尿囊液.小鼠接毒后连续观察14 d,观察记录临床症状、体温、体重变化,对在实验期间死亡和实验14 d结束后仍然存活的小鼠均进行组织器官病理取材,进行RT-PCR病毒分离检测、HE染色及H5N1抗原特异性免疫组化染色.结果 ①临床症状:H5N1禽流感病毒能感染五个品系的小鼠,引起呼吸急促等症状和一过性体重、体温下降.②死亡情况:小鼠在接毒后第1天即出现死亡,死亡的高峰期集中在接毒后第3～6天.五个品系小鼠死亡率存在差异,BALB/c为70%,ICR为50%,NIH Swiss为40%,C57BL/6为25%,KM Swiss为10%;③病毒分离:各组接毒小鼠在死亡后均进行了病毒分离,死亡小鼠的肺脏均分离到病毒,其他脏器未分离到病毒.④病理变化:实验期间五个品系死亡小鼠肺脏病理改变相近.大体观:死亡小鼠肺部淤血,呈暗红色,体积增大,局部肺组织实变.镜下观:死亡小鼠的共同病理改变为间质性肺炎,具体表现为肺泡腔及间质出血、炎性细胞浸润;间质增生,肺泡隔增宽;肺泡腔中见纤维素性渗出,透明膜形成.⑤免疫组化结果:在死亡小鼠的气管上皮细胞和肺巨噬细胞可观察到H5N1禽流感病毒阳性表达.结论 小鼠作为H5N1禽流感病毒模型具有普适性,不同品系小鼠感染鹅源H5N1禽流感病毒的临床症状、病程和病理变化与人禽流感病例相似.不同品系小鼠的死亡比例有明显差别,可以根据不同的实验目的,选择不同品系的小鼠制作H5N1禽流感动物模型.不同品系的遗传特性对禽流感易感性产生明显的影响,遗传背景可能与H5N1禽流感病毒感染应答机理存在联系:BALB/c和C57BL/6均为近交系,其中BALB/c小鼠的品系特征之一表现为干扰素产量低,接种H5N1病毒后表现为高死亡率(70%),而C57BL/6小鼠的干扰素产量高,接种H5N1病毒后表现为低死亡率(25%),提示不同遗传背景小鼠的干扰素水平与H5N1感染致死具相关性.为进一步研究H5N1禽流感病毒易感性相关基因以及其与宿主免疫反应的关系提供了一个研究基础.
目的 比較瞭不同遺傳揹景小鼠對禽流感H5N1亞型病毒的緻病敏感性,為H5N1禽流感模型製作和機理研究提供依據.方法 近交繫BALB/c、C57BL/6和封閉群ICR、NIH Swiss和KM Swiss共五箇不同品繫小鼠.每箇品繫實驗動物30隻,分接毒組20隻,空白對照組10隻,每組雌雄各半.病毒株為A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1),經測定TCID50為10-4.875/mL.接毒組通過鼻腔接種0.1 mL病毒液,對照組接種正常鷄胚尿囊液.小鼠接毒後連續觀察14 d,觀察記錄臨床癥狀、體溫、體重變化,對在實驗期間死亡和實驗14 d結束後仍然存活的小鼠均進行組織器官病理取材,進行RT-PCR病毒分離檢測、HE染色及H5N1抗原特異性免疫組化染色.結果 ①臨床癥狀:H5N1禽流感病毒能感染五箇品繫的小鼠,引起呼吸急促等癥狀和一過性體重、體溫下降.②死亡情況:小鼠在接毒後第1天即齣現死亡,死亡的高峰期集中在接毒後第3～6天.五箇品繫小鼠死亡率存在差異,BALB/c為70%,ICR為50%,NIH Swiss為40%,C57BL/6為25%,KM Swiss為10%;③病毒分離:各組接毒小鼠在死亡後均進行瞭病毒分離,死亡小鼠的肺髒均分離到病毒,其他髒器未分離到病毒.④病理變化:實驗期間五箇品繫死亡小鼠肺髒病理改變相近.大體觀:死亡小鼠肺部淤血,呈暗紅色,體積增大,跼部肺組織實變.鏡下觀:死亡小鼠的共同病理改變為間質性肺炎,具體錶現為肺泡腔及間質齣血、炎性細胞浸潤;間質增生,肺泡隔增寬;肺泡腔中見纖維素性滲齣,透明膜形成.⑤免疫組化結果:在死亡小鼠的氣管上皮細胞和肺巨噬細胞可觀察到H5N1禽流感病毒暘性錶達.結論 小鼠作為H5N1禽流感病毒模型具有普適性,不同品繫小鼠感染鵝源H5N1禽流感病毒的臨床癥狀、病程和病理變化與人禽流感病例相似.不同品繫小鼠的死亡比例有明顯差彆,可以根據不同的實驗目的,選擇不同品繫的小鼠製作H5N1禽流感動物模型.不同品繫的遺傳特性對禽流感易感性產生明顯的影響,遺傳揹景可能與H5N1禽流感病毒感染應答機理存在聯繫:BALB/c和C57BL/6均為近交繫,其中BALB/c小鼠的品繫特徵之一錶現為榦擾素產量低,接種H5N1病毒後錶現為高死亡率(70%),而C57BL/6小鼠的榦擾素產量高,接種H5N1病毒後錶現為低死亡率(25%),提示不同遺傳揹景小鼠的榦擾素水平與H5N1感染緻死具相關性.為進一步研究H5N1禽流感病毒易感性相關基因以及其與宿主免疫反應的關繫提供瞭一箇研究基礎.
목적 비교료불동유전배경소서대금류감H5N1아형병독적치병민감성,위H5N1금류감모형제작화궤리연구제공의거.방법 근교계BALB/c、C57BL/6화봉폐군ICR、NIH Swiss화KM Swiss공오개불동품계소서.매개품계실험동물30지,분접독조20지,공백대조조10지,매조자웅각반.병독주위A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1),경측정TCID50위10-4.875/mL.접독조통과비강접충0.1 mL병독액,대조조접충정상계배뇨낭액.소서접독후련속관찰14 d,관찰기록림상증상、체온、체중변화,대재실험기간사망화실험14 d결속후잉연존활적소서균진행조직기관병리취재,진행RT-PCR병독분리검측、HE염색급H5N1항원특이성면역조화염색.결과 ①림상증상:H5N1금류감병독능감염오개품계적소서,인기호흡급촉등증상화일과성체중、체온하강.②사망정황:소서재접독후제1천즉출현사망,사망적고봉기집중재접독후제3～6천.오개품계소서사망솔존재차이,BALB/c위70%,ICR위50%,NIH Swiss위40%,C57BL/6위25%,KM Swiss위10%;③병독분리:각조접독소서재사망후균진행료병독분리,사망소서적폐장균분리도병독,기타장기미분리도병독.④병리변화:실험기간오개품계사망소서폐장병리개변상근.대체관:사망소서폐부어혈,정암홍색,체적증대,국부폐조직실변.경하관:사망소서적공동병리개변위간질성폐염,구체표현위폐포강급간질출혈、염성세포침윤;간질증생,폐포격증관;폐포강중견섬유소성삼출,투명막형성.⑤면역조화결과:재사망소서적기관상피세포화폐거서세포가관찰도H5N1금류감병독양성표체.결론 소서작위H5N1금류감병독모형구유보괄성,불동품계소서감염아원H5N1금류감병독적림상증상、병정화병리변화여인금류감병례상사.불동품계소서적사망비례유명현차별,가이근거불동적실험목적,선택불동품계적소서제작H5N1금류감동물모형.불동품계적유전특성대금류감역감성산생명현적영향,유전배경가능여H5N1금류감병독감염응답궤리존재련계:BALB/c화C57BL/6균위근교계,기중BALB/c소서적품계특정지일표현위간우소산량저,접충H5N1병독후표현위고사망솔(70%),이C57BL/6소서적간우소산량고,접충H5N1병독후표현위저사망솔(25%),제시불동유전배경소서적간우소수평여H5N1감염치사구상관성.위진일보연구H5N1금류감병독역감성상관기인이급기여숙주면역반응적관계제공료일개연구기출.
Objective To test our hypothesis that sensitivity to avian influenza A(H5N1)virus varies among mouse strain backgrounds, we compared the pathogenicity of H5N1 viral infection in 5 mouse strains. Methods Onehundred-fifty mice from 2 inbred strains(BALB/c and C57BL/6), and 3 outbred stocks(ICR, NIH Swiss, and KM Swiss)were used. Thirty mice of each strain were subjected to an infected group(20 mice), in which mice were inoculated with 0. 1 mL(104.875 TCID50)of A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1)virus intra-nasally; ten control mice received noninfectious allantoic fluid. Clinical signs were assessed daily for 14 days post-infection. Necropsy was performed on mice that died during the experiment and those euthanized at end of study. Tissue samples were collected for viral isolation and pathological analysis. Results H5N1 virus infection can cause respiratory illness in all 5 strains with severe or minor acute respiratory distress symptoms, but with different mortality rates: 70% in BALB/c; 50% in ICR; 40% in NIH Swiss; 25% in C57BL/6; and 10% in KM Swiss mice. Necrotizing interstitial pneumonia was found in all cases of death. The virus was isolated from the lungs of all infected dead mice. Conclusion A/Goose/Guangdong/NH/2003 (H5N1)virus can infect all mouse strains used in this study, and can cause clinical symptoms and pathological changes similar to those found in humans infected with HSN1 viruses. However, the pathogenicity of H5N1 viral infection varies significantly between the different mouse strains. Thus, in future study of H5N1 virus infections the mouse strain most relevant to their particular research purpose should be selected as animal model.
