畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
12期
16-21
,共6页
李健%谢爱织%陈沁%王巧全%熊炜%张建武%王权%胡永强
李健%謝愛織%陳沁%王巧全%熊煒%張建武%王權%鬍永彊
리건%사애직%진심%왕교전%웅위%장건무%왕권%호영강
冠状病毒%基因芯片%杂交%检测
冠狀病毒%基因芯片%雜交%檢測
관상병독%기인심편%잡교%검측
采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆.煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片.抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗人反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段.结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV.将这些特异克降扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象.基因芯片检测比传统PCR敏感1 000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分.
採用蔗糖密度梯度離心,純化濃縮犬冠狀病毒(CCV)、貓冠狀病毒(FCV)、貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬呼吸道冠狀病毒(PRCV)的細胞培養物,分彆設計7,17,11,10和4對引物,構建瞭49箇基因片段的剋隆.煮沸裂解法製備質粒DNA,迴收PCR擴增產物,點製冠狀病毒基因芯片.抽提病毒總RNA,利用Cy3-dCTP隨機滲人反轉錄PCR標記,與芯片進行雜交檢測,淘汰交扠的剋隆片段.結果錶明:剋隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特異診斷CCV,剋隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特異診斷FCV,剋隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特異診斷FIPV,剋隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特異診斷PRCV,剋隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特異診斷TGEV.將這些特異剋降擴增片段重新點製基因芯片,與病毒PCR產物雜交,未髮現交扠現象.基因芯片檢測比傳統PCR敏感1 000倍,可有效應用于這5種動物冠狀病毒的檢測與區分.
채용자당밀도제도리심,순화농축견관상병독(CCV)、묘관상병독(FCV)、묘전염성복막염병독(FIPV)、저전염성위장염병독(TGEV)、저호흡도관상병독(PRCV)적세포배양물,분별설계7,17,11,10화4대인물,구건료49개기인편단적극륭.자비렬해법제비질립DNA,회수PCR확증산물,점제관상병독기인심편.추제병독총RNA,이용Cy3-dCTP수궤삼인반전록PCR표기,여심편진행잡교검측,도태교차적극륭편단.결과표명:극륭CCV1,CCV2,CCV5화CCV7가특이진단CCV,극륭FCV6,FCV7,FCV8화FCV9가특이진단FCV,극륭FIPV2,FIPV7,FIPV8화FIPV9가특이진단FIPV,극륭PRCV1,PRCV2화PRCV3가특이진단PRCV,극륭TGEV3,TGEV4,TGEV5화TGEV6가특이진단TGEV.장저사특이극강확증편단중신점제기인심편,여병독PCR산물잡교,미발현교차현상.기인심편검측비전통PCR민감1 000배,가유효응용우저5충동물관상병독적검측여구분.
