四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2011年
6期
871-875
,共5页
范建超%赵成建%王晓飞%任斌%杨寒朔
範建超%趙成建%王曉飛%任斌%楊寒朔
범건초%조성건%왕효비%임빈%양한삭
斑马鱼%快速鉴定%真核质粒%基因表达
斑馬魚%快速鑒定%真覈質粒%基因錶達
반마어%쾌속감정%진핵질립%기인표체
目的建立利用斑马鱼胚胎快速鉴定真核质粒中目的基因表达的实验体系.方法选20枚斑马鱼受精卵,在显微镜下每隔1h记录胚胎的发育情况.另选250枚单细胞期斑马鱼胚胎,平均分成5组,一组胚胎作为对照,剩余4组分别向胚胎的单细胞内注射pEGFP-N1(真核表达质粒)、pCMV-DsRed-Express2(真核表达质粒)、pET28-GFP(原核表达质粒)、pET28-RFP(原核表达质粒)质粒,在不同时间点连续观察绿色荧光及红色荧光的表达情况.另选600枚单细胞期斑马鱼胚胎,平均分成3组,一组胚胎作为对照,一组向胚胎单细胞内注射pEGFP-N1质粒,另外一组向胚胎单细胞内注射pEGFP-N1-MUC1外源基因融合重组质粒,注射4h后在荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况,并用RT-PCR的方法检测目的基因MUC1 mRNA的转录情况.结果注射pEGFP-N1、pCMV-DsRed-Express2真核表达质粒的胚胎,注射4 h后分别观察到很强的绿色荧光及红色荧光;注射pET28-GFP、pET28.RFP原核表达质粒的胚胎,10 h内都未观察到绿色荧光及红色荧光;注射pEGFP-N1-MUC1外源基因融合质粒,注射4h后同样观察到很强的绿色荧光,且用RT-PCR方法检测到目的基因MUC1很强的表达.结论利用斑马鱼胚胎鉴定真核重组质粒中目的基因的表达情况是一种快速、有效的实验体系.
目的建立利用斑馬魚胚胎快速鑒定真覈質粒中目的基因錶達的實驗體繫.方法選20枚斑馬魚受精卵,在顯微鏡下每隔1h記錄胚胎的髮育情況.另選250枚單細胞期斑馬魚胚胎,平均分成5組,一組胚胎作為對照,剩餘4組分彆嚮胚胎的單細胞內註射pEGFP-N1(真覈錶達質粒)、pCMV-DsRed-Express2(真覈錶達質粒)、pET28-GFP(原覈錶達質粒)、pET28-RFP(原覈錶達質粒)質粒,在不同時間點連續觀察綠色熒光及紅色熒光的錶達情況.另選600枚單細胞期斑馬魚胚胎,平均分成3組,一組胚胎作為對照,一組嚮胚胎單細胞內註射pEGFP-N1質粒,另外一組嚮胚胎單細胞內註射pEGFP-N1-MUC1外源基因融閤重組質粒,註射4h後在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光的錶達情況,併用RT-PCR的方法檢測目的基因MUC1 mRNA的轉錄情況.結果註射pEGFP-N1、pCMV-DsRed-Express2真覈錶達質粒的胚胎,註射4 h後分彆觀察到很彊的綠色熒光及紅色熒光;註射pET28-GFP、pET28.RFP原覈錶達質粒的胚胎,10 h內都未觀察到綠色熒光及紅色熒光;註射pEGFP-N1-MUC1外源基因融閤質粒,註射4h後同樣觀察到很彊的綠色熒光,且用RT-PCR方法檢測到目的基因MUC1很彊的錶達.結論利用斑馬魚胚胎鑒定真覈重組質粒中目的基因的錶達情況是一種快速、有效的實驗體繫.
목적건립이용반마어배태쾌속감정진핵질립중목적기인표체적실험체계.방법선20매반마어수정란,재현미경하매격1h기록배태적발육정황.령선250매단세포기반마어배태,평균분성5조,일조배태작위대조,잉여4조분별향배태적단세포내주사pEGFP-N1(진핵표체질립)、pCMV-DsRed-Express2(진핵표체질립)、pET28-GFP(원핵표체질립)、pET28-RFP(원핵표체질립)질립,재불동시간점련속관찰록색형광급홍색형광적표체정황.령선600매단세포기반마어배태,평균분성3조,일조배태작위대조,일조향배태단세포내주사pEGFP-N1질립,령외일조향배태단세포내주사pEGFP-N1-MUC1외원기인융합중조질립,주사4h후재형광현미경하관찰록색형광적표체정황,병용RT-PCR적방법검측목적기인MUC1 mRNA적전록정황.결과주사pEGFP-N1、pCMV-DsRed-Express2진핵표체질립적배태,주사4 h후분별관찰도흔강적록색형광급홍색형광;주사pET28-GFP、pET28.RFP원핵표체질립적배태,10 h내도미관찰도록색형광급홍색형광;주사pEGFP-N1-MUC1외원기인융합질립,주사4h후동양관찰도흔강적록색형광,차용RT-PCR방법검측도목적기인MUC1흔강적표체.결론이용반마어배태감정진핵중조질립중목적기인적표체정황시일충쾌속、유효적실험체계.
