中国输血杂志
中國輸血雜誌
중국수혈잡지
CHINESE JOURNAL OF BLOOD TRANSFUSION
2004年
4期
227-231
,共5页
郭斯启%奚永志%崔建武%习彩霞%刘楠%梁飞%孔繁华
郭斯啟%奚永誌%崔建武%習綵霞%劉楠%樑飛%孔繁華
곽사계%해영지%최건무%습채하%류남%량비%공번화
干细胞因子,重组%大肠杆菌%高效表达
榦細胞因子,重組%大腸桿菌%高效錶達
간세포인자,중조%대장간균%고효표체
目的探索并建立人干细胞因子(SCF)的原核高效表达系统.方法设计特异性引物,以RT-PCR从人胎肝组织中扩增出干细胞因子的膜外区活性片段,克隆进入pGEM-T载体.以Goldkey软件进行翻译起始序列RNA结构和自由能优化;通过合成寡核苷酸和PCR技术将SCF cDNA中的原核稀有密码子定点突变为同义的高频密码子;酶切连接构建多种原核表达载体并比较它们在宿主菌中诱导表达结果.表达产物经SDS-PAGE、Western Blot和MTT活性鉴定.结果扩增SCF膜外区序列测定正确.构建的原核表达载体pET32a(+)-SCF在大肠杆菌中获得高效融合表达,表达产量达30%以上,Western B1ot鉴定正确,初步纯化产物的活性与标准品相似.结论根据使用的载体/宿主系统,翻译起始序列(TIS)的RNA结构和自由能优化、稀有密码子突变对表达无影响;SCF基因在5'端融合要比3'端融合表达效率高.
目的探索併建立人榦細胞因子(SCF)的原覈高效錶達繫統.方法設計特異性引物,以RT-PCR從人胎肝組織中擴增齣榦細胞因子的膜外區活性片段,剋隆進入pGEM-T載體.以Goldkey軟件進行翻譯起始序列RNA結構和自由能優化;通過閤成寡覈苷痠和PCR技術將SCF cDNA中的原覈稀有密碼子定點突變為同義的高頻密碼子;酶切連接構建多種原覈錶達載體併比較它們在宿主菌中誘導錶達結果.錶達產物經SDS-PAGE、Western Blot和MTT活性鑒定.結果擴增SCF膜外區序列測定正確.構建的原覈錶達載體pET32a(+)-SCF在大腸桿菌中穫得高效融閤錶達,錶達產量達30%以上,Western B1ot鑒定正確,初步純化產物的活性與標準品相似.結論根據使用的載體/宿主繫統,翻譯起始序列(TIS)的RNA結構和自由能優化、稀有密碼子突變對錶達無影響;SCF基因在5'耑融閤要比3'耑融閤錶達效率高.
목적탐색병건립인간세포인자(SCF)적원핵고효표체계통.방법설계특이성인물,이RT-PCR종인태간조직중확증출간세포인자적막외구활성편단,극륭진입pGEM-T재체.이Goldkey연건진행번역기시서렬RNA결구화자유능우화;통과합성과핵감산화PCR기술장SCF cDNA중적원핵희유밀마자정점돌변위동의적고빈밀마자;매절련접구건다충원핵표체재체병비교타문재숙주균중유도표체결과.표체산물경SDS-PAGE、Western Blot화MTT활성감정.결과확증SCF막외구서렬측정정학.구건적원핵표체재체pET32a(+)-SCF재대장간균중획득고효융합표체,표체산량체30%이상,Western B1ot감정정학,초보순화산물적활성여표준품상사.결론근거사용적재체/숙주계통,번역기시서렬(TIS)적RNA결구화자유능우화、희유밀마자돌변대표체무영향;SCF기인재5'단융합요비3'단융합표체효솔고.
