中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2006年
6期
578-579,582
,共3页
母敬郁%王曦%王峤%陈阳%王恩思
母敬鬱%王晞%王嶠%陳暘%王恩思
모경욱%왕희%왕교%진양%왕은사
毕赤酵母%Thermomonospora fusca%纤维素酶Cel6A%层析
畢赤酵母%Thermomonospora fusca%纖維素酶Cel6A%層析
필적효모%Thermomonospora fusca%섬유소매Cel6A%층석
目的 在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.方法 提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代.选择稳定株,培养3 d后取培养液上清,用His-Bind Quick Cartridge 300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.结果 一步His-Bind Quick Cartridge 300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60 000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500 U/mg,用滤纸法测活性为1 U/mg.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.
目的 在畢赤酵母中錶達Thermomonospora fusca纖維素酶Cel6A.方法 提取Thermomonospora fusca基因組DNA作模闆,PCR擴增纖維素酶Cel6A基因,剋隆到畢赤酵母錶達載體pGAPZαA上,用電擊法將線性Cel6A-pGAPZαA覈痠片段轉化畢赤酵母X-33株,剋隆PCR鑒定法篩選暘性轉化株,培養傳代.選擇穩定株,培養3 d後取培養液上清,用His-Bind Quick Cartridge 300提取錶達的重組Thermomonospora fusca纖維素酶Cel6A.結果 一步His-Bind Quick Cartridge 300層析可提取電泳純的重組Thermomonospora fusca纖維素酶Cel6A,SDS-PAGE分析顯示相對分子質量約為60 000,收率為200mg/L,用羧甲基纖維素法測活性為500 U/mg,用濾紙法測活性為1 U/mg.結論 已在畢赤酵母中成功錶達瞭Thermomonospora fusca纖維素酶Cel6A.
목적 재필적효모중표체Thermomonospora fusca섬유소매Cel6A.방법 제취Thermomonospora fusca기인조DNA작모판,PCR확증섬유소매Cel6A기인,극륭도필적효모표체재체pGAPZαA상,용전격법장선성Cel6A-pGAPZαA핵산편단전화필적효모X-33주,극륭PCR감정법사선양성전화주,배양전대.선택은정주,배양3 d후취배양액상청,용His-Bind Quick Cartridge 300제취표체적중조Thermomonospora fusca섬유소매Cel6A.결과 일보His-Bind Quick Cartridge 300층석가제취전영순적중조Thermomonospora fusca섬유소매Cel6A,SDS-PAGE분석현시상대분자질량약위60 000,수솔위200mg/L,용최갑기섬유소법측활성위500 U/mg,용려지법측활성위1 U/mg.결론 이재필적효모중성공표체료Thermomonospora fusca섬유소매Cel6A.
