中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2007年
2期
124-128
,共5页
李金福%陈建平%田玉%杨志伟%马莹%胡孝素
李金福%陳建平%田玉%楊誌偉%馬瑩%鬍孝素
리금복%진건평%전옥%양지위%마형%호효소
杜氏利什曼原虫%无鞭毛体蛋白%基因克隆%表达
杜氏利什曼原蟲%無鞭毛體蛋白%基因剋隆%錶達
두씨리십만원충%무편모체단백%기인극륭%표체
目的 克隆、真核表达杜氏利什曼原虫四川株的无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因.方法 PCR扩增杜氏利什曼原虫四川汶川人株L.d.SC10H2与四川南坪犬株L.d.SC7的无鞭毛体蛋白基因,将该基因导入poDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒,转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法鉴定重组质粒的瞬时表达;RT-PCR和Western blotting鉴定稳定表达.结果 2株杜氏利什曼原虫均扩增出552 bp的无鞭毛体蛋白基因,同源性为86%.转染后在NIH3T3细胞膜和细胞内观察到较强的绿色荧光,表明无鞭毛体蛋白基因在NIH3T3细胞中获得短暂表达.细胞裂解产物经Westernblotting,在相对分子质量(Mr)约20000处检测到阳性杂交信号,表明无鞭毛体蛋白基因在NIH3T3细胞内获得了稳定表达.结论 获得了我国杜氏利什曼原虫四川分离株L.d.SC10H2和L.d.SC7的无鞭毛体蛋白基因序列,并在NIH3T3细胞中稳定表达.
目的 剋隆、真覈錶達杜氏利什曼原蟲四川株的無鞭毛體蛋白(amastin)編碼基因.方法 PCR擴增杜氏利什曼原蟲四川汶川人株L.d.SC10H2與四川南坪犬株L.d.SC7的無鞭毛體蛋白基因,將該基因導入poDNA3.1(+),構建真覈錶達重組質粒,轉染NIH3T3細胞,採用免疫熒光法鑒定重組質粒的瞬時錶達;RT-PCR和Western blotting鑒定穩定錶達.結果 2株杜氏利什曼原蟲均擴增齣552 bp的無鞭毛體蛋白基因,同源性為86%.轉染後在NIH3T3細胞膜和細胞內觀察到較彊的綠色熒光,錶明無鞭毛體蛋白基因在NIH3T3細胞中穫得短暫錶達.細胞裂解產物經Westernblotting,在相對分子質量(Mr)約20000處檢測到暘性雜交信號,錶明無鞭毛體蛋白基因在NIH3T3細胞內穫得瞭穩定錶達.結論 穫得瞭我國杜氏利什曼原蟲四川分離株L.d.SC10H2和L.d.SC7的無鞭毛體蛋白基因序列,併在NIH3T3細胞中穩定錶達.
목적 극륭、진핵표체두씨리십만원충사천주적무편모체단백(amastin)편마기인.방법 PCR확증두씨리십만원충사천문천인주L.d.SC10H2여사천남평견주L.d.SC7적무편모체단백기인,장해기인도입poDNA3.1(+),구건진핵표체중조질립,전염NIH3T3세포,채용면역형광법감정중조질립적순시표체;RT-PCR화Western blotting감정은정표체.결과 2주두씨리십만원충균확증출552 bp적무편모체단백기인,동원성위86%.전염후재NIH3T3세포막화세포내관찰도교강적록색형광,표명무편모체단백기인재NIH3T3세포중획득단잠표체.세포렬해산물경Westernblotting,재상대분자질량(Mr)약20000처검측도양성잡교신호,표명무편모체단백기인재NIH3T3세포내획득료은정표체.결론 획득료아국두씨리십만원충사천분리주L.d.SC10H2화L.d.SC7적무편모체단백기인서렬,병재NIH3T3세포중은정표체.
