山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
21期
22-25
,共4页
李峰%刘玉光%朱树干%张良文%张泽立%张学广
李峰%劉玉光%硃樹榦%張良文%張澤立%張學廣
리봉%류옥광%주수간%장량문%장택립%장학엄
机械分离法%胰酶消化分离法%神经干细胞%连续性传代%神经发生
機械分離法%胰酶消化分離法%神經榦細胞%連續性傳代%神經髮生
궤계분리법%이매소화분리법%신경간세포%련속성전대%신경발생
目的 探讨神经干细胞(NSCs)培养的分离传代技术及其在长期培养条件下的神经发生能力.方法取孕14d的Wistar胎鼠大脑皮层,消化分离后,以1×105/ml浓度进行NSCs原代培养.分别采用机械分离与胰酶消化法进行NSCs传代培养,台盼蓝活细胞计数测定分离后细胞存活率,计算细胞倍增时间和细胞增殖率.取第4、8、12、20、30代机械分离传代培养的NSCs球接种到24孔培养板中的盖玻片上,加入分化培养液,观察长期培养条件下NSCs的神经发生能力的变化.结果与胰酶消化法进行的NSCs球传代相比,机械分离的NSCs球为小细胞球和单细胞传代,传代后细胞存活率高,细胞倍增时间短,增殖能力强(P均<0.05).体外长期培养条件下,随着培养时间的延长,NSCs分化为神经元的比例逐渐降低,星形胶质细胞的比例逐渐增高;在4～12代NSCs分化为神经元的能力表现出下降的趋势,但仍较为稳定;12代后,神经元的分化比例迅速下降,星形胶质细胞的比例迅速上升.结论与胰酶消化法相比,逐步减小吸管口径的机械分离传代法,减少了传代对细胞的损伤,保证了大部分细胞间连接的完整性,显著增强了NSCs的增殖能力.体外长期扩增的NSCs,由于微环境和(或)自身基因的调控.随着传代的延续,其神经发生能力逐渐降低,分化为神经元的比例逐渐减少,分化为星形胶质细胞的比例逐渐增加.
目的 探討神經榦細胞(NSCs)培養的分離傳代技術及其在長期培養條件下的神經髮生能力.方法取孕14d的Wistar胎鼠大腦皮層,消化分離後,以1×105/ml濃度進行NSCs原代培養.分彆採用機械分離與胰酶消化法進行NSCs傳代培養,檯盼藍活細胞計數測定分離後細胞存活率,計算細胞倍增時間和細胞增殖率.取第4、8、12、20、30代機械分離傳代培養的NSCs毬接種到24孔培養闆中的蓋玻片上,加入分化培養液,觀察長期培養條件下NSCs的神經髮生能力的變化.結果與胰酶消化法進行的NSCs毬傳代相比,機械分離的NSCs毬為小細胞毬和單細胞傳代,傳代後細胞存活率高,細胞倍增時間短,增殖能力彊(P均<0.05).體外長期培養條件下,隨著培養時間的延長,NSCs分化為神經元的比例逐漸降低,星形膠質細胞的比例逐漸增高;在4～12代NSCs分化為神經元的能力錶現齣下降的趨勢,但仍較為穩定;12代後,神經元的分化比例迅速下降,星形膠質細胞的比例迅速上升.結論與胰酶消化法相比,逐步減小吸管口徑的機械分離傳代法,減少瞭傳代對細胞的損傷,保證瞭大部分細胞間連接的完整性,顯著增彊瞭NSCs的增殖能力.體外長期擴增的NSCs,由于微環境和(或)自身基因的調控.隨著傳代的延續,其神經髮生能力逐漸降低,分化為神經元的比例逐漸減少,分化為星形膠質細胞的比例逐漸增加.
목적 탐토신경간세포(NSCs)배양적분리전대기술급기재장기배양조건하적신경발생능력.방법취잉14d적Wistar태서대뇌피층,소화분리후,이1×105/ml농도진행NSCs원대배양.분별채용궤계분리여이매소화법진행NSCs전대배양,태반람활세포계수측정분리후세포존활솔,계산세포배증시간화세포증식솔.취제4、8、12、20、30대궤계분리전대배양적NSCs구접충도24공배양판중적개파편상,가입분화배양액,관찰장기배양조건하NSCs적신경발생능력적변화.결과여이매소화법진행적NSCs구전대상비,궤계분리적NSCs구위소세포구화단세포전대,전대후세포존활솔고,세포배증시간단,증식능력강(P균<0.05).체외장기배양조건하,수착배양시간적연장,NSCs분화위신경원적비례축점강저,성형효질세포적비례축점증고;재4～12대NSCs분화위신경원적능력표현출하강적추세,단잉교위은정;12대후,신경원적분화비례신속하강,성형효질세포적비례신속상승.결론여이매소화법상비,축보감소흡관구경적궤계분리전대법,감소료전대대세포적손상,보증료대부분세포간련접적완정성,현저증강료NSCs적증식능력.체외장기확증적NSCs,유우미배경화(혹)자신기인적조공.수착전대적연속,기신경발생능력축점강저,분화위신경원적비례축점감소,분화위성형효질세포적비례축점증가.
