武汉大学学报（理学版）
武漢大學學報（理學版）
무한대학학보（이학판）
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
4期
462-466
,共5页
吴正辉%郜金荣%佘应龙%叶力%叶林柏
吳正輝%郜金榮%佘應龍%葉力%葉林柏
오정휘%고금영%사응룡%협력%협림백
tPA蛋白%包涵体%复性%正交试验
tPA蛋白%包涵體%複性%正交試驗
tPA단백%포함체%복성%정교시험
大肠杆菌生产菌株诱导表达产生的无活性重组人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)包涵体蛋白,溶解于尿素中变性后进行复性.通过单因子试验和正交试验考察了不同复性条件下透析复性对tPA包涵体蛋白复性效率的影响.结果表明蛋白质浓度、复性温度、pH值、复性介质、还原剂浓度对tPA的复性效果都有不同程度的影响,当0.5 g/L tPA包涵体蛋白溶解于pH 9.5的7 mol/L的尿素,加入5 mmol/L β-巯基乙醇,在20 ℃、pH 8.0的双蒸水条件下复性时,可以取得最高的复性效率(2.0×107IU/g).通过对稀释复性、透析复性和凝胶过滤层析复性3种方法比较,建立了适宜工业化生产tPA的复性方法.
大腸桿菌生產菌株誘導錶達產生的無活性重組人組織纖溶酶原激活劑(tissue-type plasminogen activator,tPA)包涵體蛋白,溶解于尿素中變性後進行複性.通過單因子試驗和正交試驗攷察瞭不同複性條件下透析複性對tPA包涵體蛋白複性效率的影響.結果錶明蛋白質濃度、複性溫度、pH值、複性介質、還原劑濃度對tPA的複性效果都有不同程度的影響,噹0.5 g/L tPA包涵體蛋白溶解于pH 9.5的7 mol/L的尿素,加入5 mmol/L β-巰基乙醇,在20 ℃、pH 8.0的雙蒸水條件下複性時,可以取得最高的複性效率(2.0×107IU/g).通過對稀釋複性、透析複性和凝膠過濾層析複性3種方法比較,建立瞭適宜工業化生產tPA的複性方法.
대장간균생산균주유도표체산생적무활성중조인조직섬용매원격활제(tissue-type plasminogen activator,tPA)포함체단백,용해우뇨소중변성후진행복성.통과단인자시험화정교시험고찰료불동복성조건하투석복성대tPA포함체단백복성효솔적영향.결과표명단백질농도、복성온도、pH치、복성개질、환원제농도대tPA적복성효과도유불동정도적영향,당0.5 g/L tPA포함체단백용해우pH 9.5적7 mol/L적뇨소,가입5 mmol/L β-구기을순,재20 ℃、pH 8.0적쌍증수조건하복성시,가이취득최고적복성효솔(2.0×107IU/g).통과대희석복성、투석복성화응효과려층석복성3충방법비교,건립료괄의공업화생산tPA적복성방법.
