CAJ | 학술논문

本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核茵特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景.无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝.每1mL全血与1mLRPMI 1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA) CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL (2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜.次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度.结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84.但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性.相关系数为-0.11.分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应.以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头.扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54.结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高.当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛.而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆茵的影响,检测具有良好的特异性与敏感性.
본연구통과비교삼충자격물(우결핵균소、금결핵균소화우형결핵인특이성항원CFP10/ESAT6대결핵균소피내변태반응양성우적IFN-γ자격반응,탐토IFN-γ검측법재아국우결핵병진단중적응용전경.무균채집22두결핵균소피내변태반응양성우적혈액,간소항응.매1mL전혈여1mLRPMI 1640완전배양기혼합균균,병가입0.1mL(20μg)PHA(양성대조공)、0.1mL(20μg PHA) CFP10/ESAT6융합단백、0.1mL(2000U)우결핵균소(PPD/B)、0.1mL (2500U)금결핵균소(PPD/A)혹등량PBS(무자격음성대조),37℃배양과야.차일용협심ELISA법검측각자격조0.1mL배양상청적IFN-γ,이OD630표시IFN-γ농도.결과,특이성항원CFP10/ESAT6자격조여우결핵균소(PPD/B)자격조적IFN-γ반응구유량호적상관성,상관계수위0.84.단CFP10/ESAT6자격조IFN-γ농도여우화금PPD적비교반응(이량자격조IFN-γ농도차치표시)간무상관성.상관계수위-0.11.분석금PPD조적IFN-γ반응,발현실험우중유소수우대금PPD유반응.이OD630=0.17위양성반응절할치,우PPD검출양성우21두,CFP10/ESAT6검출20두,우화금PPD비교반응(이OD치차치표시)검출14두,금PPD양성반응3두.구제금PPD양성반응우후,우화금PPD비교반응여우PPD자격조적상관계수증지0.54.결과표명,우PPD적IFN-γ석방반응검측령민도최고.당출현우형결핵균여배경분지간균혼합감염시,응용우화금PPD비교반응검측우결핵적준학도저,혼합감염우피오판위결핵음성우.이기우CFP10/ESAT6적IFN-γ석방반응불수배경분지간인적영향,검측구유량호적특이성여민감성.