CAJ | 학술논문

目的: 采用双链RNA能激活细胞内蛋白激酶PKR引起细胞凋亡的策略,研究重组慢性粒细胞白血病独特的bcr/ab1 b3a2型外源反义RNA诱导白血病K562细胞的凋亡及其作用机制.方法: 用含bcr/abl融合基因序列40 bp的反转录病毒载体RV-40AS作用于白血病K562细胞,以光学显微镜、电子显微镜、FCM法和DNA梯状条带法检测细胞凋亡情况,化学比色法检测caspase-8和caspase-9活性变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2 mRNA表达变化,并以Western印迹法检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)、磷酸化PKR(p-PKR)、Bax和Bcl-2的蛋白变化.结果: RV-40AS作用K562细胞组在光学显微镜下出现胞体皱缩、染色质浓集以及折光性减弱,电子显微镜下可见细胞质电子密度增大、核固缩和出现凋亡小体;FCM法检测到凋亡细胞占(22.70±1.42)%[未处理组(3.24±0.66)%],DNA电泳出现典型的梯状条带;caspase-8和caspase-9活性升高,PKR蛋白无明显变化,但p-PKR水平升高;Bax的mRNA和蛋白表达均升高,而Bcl-2mRNA和蛋白表达水平没有明显变化.对照组和PKR抑制剂处理组均未发生上述改变.结论: bcr/abl反义RNA反转录病毒载体RV-40AS可特异性激活PKR,从而诱导白血病K562细胞发生凋亡,其可能的机制是PKR活化激活了凋亡反应的上游分子caspase-8,并通过上调Bax表达水平、降低Bcl-2/Bax的比值,导致线粒体膜稳定性被破坏,促使凋亡小体形成和caspase-9活化,最终激活其他凋亡分子使细胞发生凋亡.
목적: 채용쌍련RNA능격활세포내단백격매PKR인기세포조망적책략,연구중조만성립세포백혈병독특적bcr/ab1 b3a2형외원반의RNA유도백혈병K562세포적조망급기작용궤제.방법: 용함bcr/abl융합기인서렬40 bp적반전록병독재체RV-40AS작용우백혈병K562세포,이광학현미경、전자현미경、FCM법화DNA제상조대법검측세포조망정황,화학비색법검측caspase-8화caspase-9활성변화,RT-PCR법검측Bax、Bcl-2 mRNA표체변화,병이Western인적법검측쌍련RNA의뢰성단백격매(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)、린산화PKR(p-PKR)、Bax화Bcl-2적단백변화.결과: RV-40AS작용K562세포조재광학현미경하출현포체추축、염색질농집이급절광성감약,전자현미경하가견세포질전자밀도증대、핵고축화출현조망소체;FCM법검측도조망세포점(22.70±1.42)%[미처리조(3.24±0.66)%],DNA전영출현전형적제상조대;caspase-8화caspase-9활성승고,PKR단백무명현변화,단p-PKR수평승고;Bax적mRNA화단백표체균승고,이Bcl-2mRNA화단백표체수평몰유명현변화.대조조화PKR억제제처리조균미발생상술개변.결론: bcr/abl반의RNA반전록병독재체RV-40AS가특이성격활PKR,종이유도백혈병K562세포발생조망,기가능적궤제시PKR활화격활료조망반응적상유분자caspase-8,병통과상조Bax표체수평、강저Bcl-2/Bax적비치,도치선립체막은정성피파배,촉사조망소체형성화caspase-9활화,최종격활기타조망분자사세포발생조망.