生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
1期
165-169
,共5页
双乙酰%乳酸乳球菌%α-乙酰乳酸合成酶%分子伴侣%共表达
雙乙酰%乳痠乳毬菌%α-乙酰乳痠閤成酶%分子伴侶%共錶達
쌍을선%유산유구균%α-을선유산합성매%분자반려%공표체
大肠杆菌自身代谢特征具有发酵生产双乙酰的天然优势.利用PCR技术,以广泛用于双乙酰生产的Lactococcus lactis基因组DNA为模板,克隆得到α-乙酰乳酸合成酶基因α-als,将其构建在表达载体pET-30a上.与能够高效表达3种大肠杆菌来源HSP 70家族分子伴侣的pKJE 7质粒共同转化E.coli BL21(DE3).利用目的蛋白质分子伴侣共表达的方法,首次获得了能够高效表达具有酶活力的α-乙酰乳酸合成酶的重组大肠杆菌.在静置培养条件下,能够在该菌株的培养基中检测到双乙酰的生成.融合蛋白酶在温度为30-40%和pH在6-7之间时具有较高的酶活,以丙酮酸为底物,该酶最适pH为6.8,最适温度为39℃.
大腸桿菌自身代謝特徵具有髮酵生產雙乙酰的天然優勢.利用PCR技術,以廣汎用于雙乙酰生產的Lactococcus lactis基因組DNA為模闆,剋隆得到α-乙酰乳痠閤成酶基因α-als,將其構建在錶達載體pET-30a上.與能夠高效錶達3種大腸桿菌來源HSP 70傢族分子伴侶的pKJE 7質粒共同轉化E.coli BL21(DE3).利用目的蛋白質分子伴侶共錶達的方法,首次穫得瞭能夠高效錶達具有酶活力的α-乙酰乳痠閤成酶的重組大腸桿菌.在靜置培養條件下,能夠在該菌株的培養基中檢測到雙乙酰的生成.融閤蛋白酶在溫度為30-40%和pH在6-7之間時具有較高的酶活,以丙酮痠為底物,該酶最適pH為6.8,最適溫度為39℃.
대장간균자신대사특정구유발효생산쌍을선적천연우세.이용PCR기술,이엄범용우쌍을선생산적Lactococcus lactis기인조DNA위모판,극륭득도α-을선유산합성매기인α-als,장기구건재표체재체pET-30a상.여능구고효표체3충대장간균래원HSP 70가족분자반려적pKJE 7질립공동전화E.coli BL21(DE3).이용목적단백질분자반려공표체적방법,수차획득료능구고효표체구유매활력적α-을선유산합성매적중조대장간균.재정치배양조건하,능구재해균주적배양기중검측도쌍을선적생성.융합단백매재온도위30-40%화pH재6-7지간시구유교고적매활,이병동산위저물,해매최괄pH위6.8,최괄온도위39℃.
